Comment rendre un milieu de culture anaérobie ?

[Gary1er]

Bonjour,


J'aimerais mettre en culture des bactéries anaérobies strictes (Clostridium Acetobutylicum et Clostridium Butyricum). Comment puis-je faire pour rendre mon milieu anaérobie ?

Dois-je utiliser des levures Saccharomyces Cerevisiae pour qu'elles remplissent tout mon milieu de culture avec du CO2 puis les tuer par chauffage avant d'y ajouter les Clostridium ou juste ajouter les Clostridium ? (Risque de compétition entre les 2 espèces ?)

De plus, ces Clostridium se trouvent dans la terre, le lait ou le vieux fromage, il risque d'y avoir d'autres bactéries... Un simple chauffage puis une mise en culture en gélose dans un tube (Pour sélectionner les anaérobies, au fond du tube) suffisent pour n'avoir que les Clostridium (Qui résistent jusqu'à 80C°) ?

Et puis quelle source d'énergie consomment-ils à la place de l'Oxygène, que dois-je rajouter dans mon milieu de culture pour qu'ils aient de quoi bien vivre ?



Merci.
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[Fely]

Bonsoir,
Déjà, l'oxygène n'est pas une source d'énergie en soi, ces bactéries sont surement fermentaires (et très probablement en rapport avec le butanone et l'acétone d'après leur nom !) donc une source de matière organique leur est nécessaire uniquement.
Après je sais pas vraiment si cela peut être compatible avec ce protocole mais pour que l'enceinte de l’expérience soit en anaérobie je dirais qu'il suffit de faire consumer une bougie dans l'enceinte fermée en début d’expérience, celle ci s'éteindra quand le milieu sera anaérobie.. Le travail est maintenant de trouver une enceinte adaptée !

[Gary1er]

En fait C.Acetobutylicum produit en effet de l'Acétone mais aussi du Butan-1-ol et de l'éthanol. Et C.Butyricum ainsi que C.Tyrobutyricum produisent de l'Acide Butanoïque.


J'ai déjà réalisé des fermentations Alcooliques dans des bouteilles d'eau en plastique, je pense que je vais continuer sur les bouteilles d'eau.
J'avais pensé à introduire une bûchette enflammée dans la bouteille. (Pour éviter que la bouteille brûle, j'y introduis un peu de CO₂ à l'aide d'un générateur Vinaigre+Bicarbonate). Mais le problème de la bûchette, c'est que ça va laisser des produits de combustion dans la bouteille et je ne sais pas si c'est très bon pour les bactéries.
Sinon j'avais également pensé à utiliser un générateur de CO₂ depuis une fermentation Alcoolique avec un tuyau reliant les 2 bouteilles mais là, gare aux fuites ou à la pression trop forte... Peut-être qu'un trou inférieur à 1mm bouché par un ruban adhésif pourrait faire l'affaire (Si la pression est trop forte, l'air s'échappe et le ruban adhésif rebouche le trou après la sortie d'air).

Comme ça, est-ce que ça pourrait le faire ou est-ce qu'il manque encore quelques petites choses ?

[biseibutsu]

Bonjour,

Plus simple : une couche d'huile
En labo, si on veut un milieu en anaérobie, on rajoute généralement une couche de paraffine liquide. L'O2 ne passant pas à travers quelque millimètre d'huile, cela devrait suffire (tant que vous ne secouez pas le milieu). De plus, si il y a production de gaz, celui ci peut normalement être évacué.

Sinon, il doit être possible d'adapter votre générateur de CO2 (vinaigre+bicarbonate) en le faisant "buller" au fond de la bouteille (en utilisant un petit tuyau). De mémoire, le CO2 est plus lourd que l'air, donc l'air "s'enfuira" par le haut et sera remplacer par le CO2.
Au cas où (même si je ne pense pas que cela soit utile), je rappelle que le CO2 est dangereux au delà de 3% en concentration pour l'Homme...

[A voir en vidéo sur Futura]

[Gary1er]

Ah oui, c'est vrai que je n'avais pas pensé à la paraffine liquide ! Bon après, je serai bien obligé de secouer la bouteille pour remettre en suspension les bactéries qui auront sédimenté par contre... Mais peut-être que la couche irait se reconstituer au bout de quelques minutes/heures ? Du coup ça ne changerait rien puisque j'ouvrirai la bouteille que quand la couche se sera bien reconstituée.

Pour le générateur, je ne l'avais pas précisé mais oui, je comptais bien faire buller le CO2 au fond de la bouteille.

[biseibutsu]

Pour la paraffine, il faut tester. Normalement, c'est assez visqueux pour que la couche ne se dilue pas dans le milieu.

[JPA80]

Bonjour,

Si tu travailles avec ces deux espèces, identifiées (?) c'est que tu es dans un labo. Sinon c'est sans espoir. Et si je comprends bien tu n'as pas de jarre anaérobie.

Le plus simple serait de cultiver en tube profond (tube effilé) dans une gélose pour anaérobie (VF, TSN, TSC...). Ensemencement dans la gélose fondue, tube vertical, sur toute la profondeur du tube, (plusieurs vrilles lentes) refroidir aussitôt. Les anaérobies vont cultiver au fond du tube. Pour récupérer une colonie il faudra casser le tube Ou l'ouvrir au coupe verre. Ensuite le problème de l'anaérobiose se posera encore pour repiquage ou identification complémentaire

[AdrienBignon]

Bonjour, je suis élève en 1ere S svt et dans le cadre de nos TPE (Epreuve du bac) nous devons obtenir un milieu anaérobique pour y réaliser une méthanisation.
Ainsi suite à mes recherches je suis tombé sur ce forum, enrichissant.
Malgré tout, moi et mon groupe recherchons des informations sur la méthode pour rendre notre milieu anaérobique. Ainsi suivant cette page deux options s'offrent à nous.
Une première consistant à y faire bruler une bougie et le milieu est rendu anaérobique lorsque la bougie s'éteint.
La deuxième consistant à intégrer a notre milieu des Saccharomyces Cerevisiae consommant l'oxygène présent et par la suite, chauffer.

Notre TPE porte sur la méthanisation, nous allons placer dans un grand réservoir sous vide nous déchets organiques, mais pour réaliser cette méthanisation une étape clée est de rendre le milieu anaérobique.

Merci de vos réponses

[Flyingbike]

ca dépend de la sensibilité des bactéries à l'oxygène

1/ en milieu liquide avec peu de volume mort dans une bouteille fermée, ca peut suffire
2/ avec des dispositifs catalytiques qui consomment l'oxygène du milieu
3/ dans une enceinte anaérobies ou les entrées se font par un sas et des cycles de desoxygénation avec un gaz et un catalyseur style palladium chloride

Une methode bactérienne ou avec S. cerevisiae modifiera le milieu (alcool par exemple)

[jordant]

Ajouter des agents réducteurs dans le milieu peut également favoriser l'anaerobiose, par exemple le thioglycolate, un milieu liquide porte d'ailleurs son nom est favorise la croissance des anaérobies: Milieu FTM (Fluid Thioglycolate Medium)

[Adrienbgn]

Bonjour, tout d'abord merci beaucoup de vos réponses rapides et précises. J'ignorais completement la possibilité de ces options, c'est pourquoi je vais tacher d'en discuter avec mes professeurs afin d'essayer d'adapter ces propositions a notre projet. Puis-je vous contacter en MP si une question se pose à ce sujet ? Milles merci à vous, bonne soirrée