Bonjour,
J'ai une enzyme que je souhaite protéger de l'oxydation. Je cherche un buffer pour solubiliser mon enzyme en conditions réductrices, et qui aurait la propriété de ne pas réduire les ponts disulfure. J'ai pensé au DTT, au β-ME mais aussi au TCEP et au Glutathion.
Avez-vous des indications sur le choix du composé à utiliser et sur sa concentration ? Vos conseils sont les bienvenus. Merci.
Bonjour,
Je réponds un peu tard mais on ne sait jamais. Le DTT et le betamercapto vont permettre de réduire les ponts disulfures mais la réduction n'est pas irréversible. Pour protéger de l’oxydation on peut utiliser un composé comme l'iodoacétamide ou chloroacétamide. Vos protéines seront donc acétylées au niveau des cystéines et resteront réduites.
GG
Merci pour ces infos, elles me serviront. Je vais probablement opter pour le DTT pas trop concentré (0.1-0.5 mM).
P.
