clonage insert

[killboul]

Bonjour, j'ai un exo ou quelques questions me posent problèmes, pouvez vous me donner un petit coup de main :

voici l’énoncé :
On dispose d'un ADNc de 2825pb obtenu à partir d'une lignée cellulaire humaine et cloné dans le vecteur lambda gt11 au site EcoR1, au sein de l'opéron lactose.
On distingue des colonies blanches et bleues.
(il fallait expliquer et interpréter ce résultat, ça j'ai réussi a le faire, mais pour la suite ça s'est compliqué !)


L'insert de 2825 pb est cloné dans un vecteur sous le contrôle d'un promoteur phagique Psp6. Après linéarisation du vecteur recombinant, celui ci est incubé en présence de l'ARN polymérase Psp6 et des 4XTP.

Questions :
Quelle expérience a été réalisée ?
J'ai pensé a la PCR de part a présence de la polymérase et des XTP, mais j'ai un gros doute.

Quelle est la taille de la molécule obtenue à l'issue de cette incubation sachant que la linéarisation du vecteur a lieu en position 2825 ?
Et la je bloque complètement.

Si quelqu'un peut m'aider...

Merci beaucoup
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[JakiJake]

Salut,



Quelle expérience a été réalisée ?
Le vecteur recombinant est linéarisé puis incubé avec une ARNpol reconnaissant le promoteur Psp6 qui se trouve également sur ton vecteur et si tu met ça avec des DNTPs j'imagine qu'il se passe une reverse transcription.

Taille ?
L'insert fait 2825bp il est dans un vecteur. Tu dois trouve la carte de se vecteur si tu veux pouvoir avoir la taille quand on le linéarise....

[killboul]

Merci de votre réponse,

Je ne comprends pas pourquoi une reverse transcription, car pour qu'il y ai RT il faut de l'ARN au départ, or nous on a de l'ADNc. Ici, ne serait ce pas plutot une transcription ?

Et concernant la taille du vecteur, l'exercice est sans carte, n'est il pas possible de trouver cette taille sans s'aider de la carte ?

[Flyingbike]

oui, transcription in vitro

[A voir en vidéo sur Futura]