Bonjour à tous,
j'aimerais quantifier et vérifier la taille de ma protéine favorite dans un ensemble d'échantillons par western blot. Jusque là pas de problème. Malheureusement, aucun anticorps commercial n'existe contre cette protéine et aucun article ne rapporte la réalisation d'un tel anticorps. Cependant, une compagnie me propose de mettre à ma disposition un sérum dirigé contre cette protéine. Si je me souviens bien mes cours de fac, un serum est un ensemble non purifié de tous les anticorps produits par un animal immunisé ce qui, par définition, entraine une spécificité très relative.
Etant donné que je travaille sur des plantes, je me demande si (i) il est vraiment nécessaire de purifier (ou au moins enrichir) mon sérum en anticorps dirigés contre ma protéine chérie et (ii) si vous pouvez me suggérer une méthode facile et pas trop longue (et idéalement ne demandant pas des équipements très onéreux) pour purifier/enrichir mon sérum.
Au cours de ma thèse, j'ai eu l'occasion de produire une protéine his-taggée et la stratégie que je voudrais mettre en place serait de procéder pareil avec ma protéine, la purifier avec le tag puis l'utiliser pour enrichir mon sérum. Sur le papier, c'est cohérent (je crois) mais comme toujours, il y a un fossé entre le papier et la paillasse. Qui plus est, je n'avais pas réussi à purifier convenablement ma protéine avec une résine TALON mais je n'avais pas insisté non plus, le projet ayant été abandonné. Quelau'un peut-il me donner un protocole robuste pour une purification similaire (qui présente l'avantage que je la connaisse déjà donc je ne vais pas perdre trois jours à faire de la biblio pour comprendre comment ça marche).
Je sais ça fait beaucoup de questions en un seul message mais je ne voulais pas le tronçonner en plusieurs posts pour garder une sorte de cohérence.
Je vous remercie par avance
Tom
-----
