Calcule d'activité spécifique à partir absorbance
Bonjour,
Voila j'aimerais savoir comment calculer une activité spécifique de mon enzyme (trypsine) à partir d'une absorbance à 280 nm (fixé pour savoir quantité de protéines dans échantillons) et à 410 nm (la pente del a mesure de l'hydrolyse de mon subtrat par mon échantillon de trypsine en fonction du temps). La personne qui m'encadre m'a dit que je pouvais soit poser A280 1mg/ml= 1 ou partir du coeff molaire= 40000 (c'est pour faire une approximation car mon échantillon n'est pas totalement pure).
Je vois que pour passer de l'activité de mon enzyme à l'activité spécifique je n'aurais car divisé par la valeur correspondant à A280 en mg/ml ou calculer la concentration avec la loi de beer-lambert. Ce que je capte pas c'est comment avoir l'activité enzymatique à partir de l'absorbance à 410nm car l'unité c'est en A/s donc une vitesse et quand je regarde sur internet ca s'exprime en mmol/min ou nkat/s... comment relier l'absorbance à une concentration de subtrat. Surement que c'est une question simple mais là je sature... c'est beer-lambert avec un autre coeff? ou je peux également exprimé mon activité spécifique en absorbance si je n'ai pas ce coeff. (Bapna)
Si vous voulez voici des valeurs: A280=0.3229 et A410nm:0.0761
Si je vais 0.0761/0.3229= 0.23 mA.ml/s.mg ca suffit car l'unité me parait bizarre pour une activité spécifique?
Merci!!!!!!
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