Recherche de méthodes fiable pour des conservations de souches bactériennes pure.

[lecomteanais8]

BONJOUR,

Étant actuellement en apprentissage dans un laboratoire vétérinaire en première année, mon maitre d'apprentissage ma demander de lui fournir dans les plus brefs délais , un protocole expérimental visant à conserver les souches bactériennes ( E.Coli ; Streptocoque ; Salmonelle ; Entérocoque ...) sans qu'il y est une détérioration sur une durée maximal de 1 ans.

Étant donner que nous sommes un petit laboratoire , nous disposons pas de très grand moyens... Nous utilisons déjà la méthode de congélation que pour les souches d'ornitho , et le repiquage sur milieux de conservation pour toutes les autres souches , or ceci prend de la place et à un certaine coût ..

Une technique m'avais parus envisageable et très intéressante , c'est celle de la culture en piqure qui se fais en tube et se conserve a 4 degrés , or quel gélose est fais pour quel bactéries? Existe t'il d'autre méthodes simple que je puisse mettre en place ?

Après de nombreuses recherches , j'arrive a un stade ou je suis complétement perdu .

Alors si quelqu'un peux m'aider , ça serrais juste un énorme soulagement et ça me permettras de faire avancer mon projet.

Ps: désoler pour l'orthographe ...
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[Flyingbike]

faire des stocks glycérol à -80 ne vous convient pas ?

[vinssss]

100% d'accord avec du glycerol 80% lol

[lecomteanais8]

si pourquoi pas ci cela est fiable . Or , comment le mettre ne place ? car j'ai trouver le principe , cependant pour réalisé un protocole , du moins les étapes , cela est plus compliquer car il y a plusieurs façons de le faire .

Quelles serraient donc les étapes me permettant de le réaliser ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[Flyingbike]

C'est fiable (largement un an)

Je ne l'ai fait que pour des cultures liquides de coli, personnellement.
Vous prenez 1 vol de votre culture assez dense, 1 vol de glycérol stérile (ne pas autoclaver :/)
Et hop à -80
(La proportion peut varier )

[vinssss]

Bonjour,
C'est fiable et très simple. Il y a effectivement plusieurs écoles.
850ul de culture en LB + 150ul glycerol 80% pour ma part.
J'ai déjà vu :
500ul culture +500ul glycerol 100%
Ou
Reprise culot dans glycerol 80%

[Flyingbike]

Bonjour,
C'est fiable et très simple. Il y a effectivement plusieurs écoles.
850ul de culture en LB + 150ul glycerol 80% pour ma part.
J'ai déjà vu :
500ul culture +500ul glycerol 100%
Ou
Reprise culot dans glycerol 80%

En effet la solution avec du glycérol 80'est mieux (c'est plus maniable = moins visqueux)

[lecomteanais8]

que signifie le terme LB ?

Désoler pour ces questions un peux stupideS mais je suis totalement novice dans ce domaine , et cela fais que depuis septembre que je fais un peux de microbiologie ....

Et l'ont viens de m'informer que nous avons que des congélateur a -20 degrés . Cela pourrais marcher ?

[vinssss]

Luria Bertani. C'est le milieu de culture classique des bactéries. À -20, si c'est pour 1an max ça ne devrait pas poser de problème.

[lecomteanais8]

Et ceci est applicable a toutes les bactéries ?

Merci beaucoup en tout cas

[vinssss]

Certaines ont des milieux spéciaux genre avec du sang par exemple. Je ne suis pas spécialiste, je ne cultive que des dérivés de E coli pour faire des clonages ou de la purif de protéines. Mais j'imagine que tout peut se congeler en glycerol.