bonjour a tous
j'ai une petite question a vous possez
a la fin de la purification d'ARN en espere d'obtenir solution d'ARN a une concentration supérieur a 1 µg/µl on vous demande demande de doser vos solution d'ARN pour ensuit les diluer a 0.25 µG/µl.
si par malchance vos sulition d'ARN étaient trop diluées (concentration < 0.25 µG/µL )
proposez une startaégie pour le concentrer a 0.25 µg/µl?
Il existent un plusieurs possibilités pour concentrer des acides nucléiques.
Précipitation à l'éthanol, à l'isopropanol, dessiccation au butanol puis lyophilisation, speed-vac.
Comme tout ça a l'air d'un exercice qu'on te pose, on va rester dans du classique, précipitation à l'ethanol. La précipitation à l'ethanol est préférée ici car on dispose d'un faible volume d'ARNs (a priori, pour une RT-PCR). Celle ci nécéssite 2.5 volumes d'ethanol contre 0.7 d'isopropanol. L'ethanol s'évapore mieux et est plus facile à éliminer que l'isopropanol.
Le protocol en détail c'est :
ajouter du NaAc 0.3M final
2.5 volumes d'ethanol 100%
et optionnellement à -80 ou -20 une bonne demi-heure pour augmenterle rendement
Et sinon, la réponse du cancre : je mets moins d'eau et plus d'ARNs dans les étapes qui suivent. Bah ouai
