Bonjour à tous, voici l'énoncé de l'exercice qui me pose problème :

Un biochimiste veut caractériser une enzyme qu'il vient de purifier. Pour cela, il fait une série d'expériences au cours desquelles il détermine la vi de la réaction enzymatique en fonction de la concentration en substrat et en présence d'un inhibiteur X à la concentration de 10^-4 molaires d'une part, d'un inhibiteur Y à la même concentration d'autre part. Pour chaque expérience, il utilise 10µL de solution enzymatique dont la teneur en protéines est de 2,5 mg/mL. Les vitesses sont exprimées, par min, en µmol de substrat transformé dans ces conditions expérimentales.

[S] mol/L 50.10^-5 20.10^-5 10.10^-5 7.10^-5 5.10^-5
v en présence
de X 10.87 7.13 4.59 3.52 2.65
v en présence
de Y 12.50 7.13 4.16 3.09 2.29

Le biochimiste sait que l'enzyme pure cristallisée a une masse molaire de 125 000 et que son activité catalytique molaire est de 175 000.
NB : on sait que l'un des inhbiteurs est compétitif et l'autre non compétitif.

1) Tracer la cinétique normale
2) Déterminer la VMax et le Km de l'enzyme
3) Calculer l'activité spécifique et l'activité enzymatique molaire (turn over)
4) Quel est le pourcentage de puereté ? Calculer les valeurs de Ki
Donc voilà, les questions 1 et 2 sont ok, je trouve un Km de 2.86x10^-4 mol/L et une Vmax de 25 UI, grâce à un graphique de Lineweaver Burk. J'ai tracé les doubles inverses avec les deux inhibiteurs, et ma droite représentant l'enzyme passe par le point de la droite le plus loin de 0 en X, et le plus proch de 0 en ordonnée. Ainsi l'affinité choisie est la plus forte (puisque km bas = affinité haute) et la vitesse la plus haute aussi. Donc X est un inhibiteur non compétitif (même km) et Y est compétitif (même vmax).

Pour la question 3, je peux calculer, mais c'est complètement aberrant avec la question 4 :

AS : on a 25 UI pour 10µL D'enzyme, soit 2500 UI pour 1mL. A une concentration de 2.5mg/mL, on a alors 1000 UI/mg d'enzyme.
AEM : Avec les 125 000 g/mol de l'enzyme, on a alors 125 000 000 mg/mol pour 1000 x 125 000 000 = 1.25x10^11 UI/mol

et c'est là que le bas blesse, le chiffre que je trouve est hallucinant non ? Comparé à l'activité de l'enzyme pure, qui n'est que de 175 000. Mais 175 000 quoi ? UI ? Ou kat ? Car si ce sont des kat ok alors ils équivalent à 10,5x10^12 UI, et alors le pourcentage de puereté devient ridicule, c'est-à-dire de 1%...

Un bon samaritin peut-il me venir en aide ?

Merci beaucoup à l'avance

(désole pour le tableau de valeur dégueulasse)