Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

[zazou123]

Bonjour à tous !
je dispose de 3 tampons de lyse mais je n'arrive pas à dire s'ils sont hypotoniques/isotoniques ou bien hypertoniques. pouvez vous m'éclairer svp. je sais qu'il y a une histoire de concentration en sels, et de mouvement d'eau mais je n'arrive pas à savoir qu'elle est la concentration intracellulaire.

tampon A : HEPES 10mM ; KCl 10mM ; MgCl2 1mM ; EDTA 0,5mM ; EGTA 0,1mM
tampon B : HEPES 20mM ; NaCl 400mM ; MgCl2 1mM ; EDTA 0,5mM ; EGTA 0,1mM
tampon C : Tris 10mM, pH 7,5 ; NaCl 150mM ; Triton X100 1% ; deoxycholate de sodium 1% ; SDS 0,1% ; NaF 5mM

merci !
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[Flyingbike]

Bonjour

Une solution isotonique (ex le sérum physiologique) est a 150 mM NaCl

Avec cela vous pouvez répondre à la question

[zazou123]

merci,

donc si j'ai bien compris :
tampon A = hypotonique et fait éclater la cellule (entrée d'eau et gonflement)
Tampon B = hypertonique donc sortie d'eau -> mais ce tampon me sert à lyser l'enveloppe nucléaire donc est ce vraiment hypertonique ? je n'arrive pas à visualiser comment ça casse la membrane nucléaire ? le noyau devient tout "petit" et finit par éclater aussi ?
tampon C = isotonique

[Flyingbike]

C'est ça

C'est le protocole de Schibler ?
Il me semble que le but est de faire sortir les protéines en même temps que l'eau, à partir du tampon B

[A voir en vidéo sur Futura]

[zazou123]

je ne sais pas si c'est le protocole de Schibler...
je fais une fragmentation cellulaire (centri différentielle) pour séparer les protéines cytosoliques et protéines nucléaires pour analyser la translocation de ma protéine d'interet.

Merci pour vos réponses !