Bonjour,
Je suis actuellement étudiante en Master 1 de génétique et je fais mon stage dans un labo de génétique et je fais beaucoup de Western Blot sur des lysats issus de lignées de liposarcomes. A chaque révélation des bandes, je constate que les bandes du contrôle que je met (la tubuline) ne sont pas identiques d'un puit à l'autre ce qui suggère que je n'ai pas déposé la même quantité de protéine dans chaque puit, mais pourtant je fais bien attention de bien déposer la même quantité de 20µl par puit (30µg de prot pour un QSP de 40µl avec du tampon de laemmli et du tampon de charge. Je fais 2 gel en même temps donc je dépose 20µl du même échantillon dans deux puit, un de chaque gel ) et bien évidemment le dosage protéique à bien été effectué et les calculs ont bien été effectués, comme je l'ai dit plus haut, je dépose 30µg donc je divise 30 par la valeur obtenue suite au dosage de l'échantillon protéique. Quelqu'un aurait une idée sur pourquoi l'intensité des bandes de la tubuline n'est pas identiques d'un puit à l'autre ? merci
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Envoyé par imenekrossa 