Etalon Interne, mode d'emploi...

[vergui59]

Bonjour,

J'effectue un stage sur un GC/MS (Chromatographie de masse couplée à un spectro de masse). Mes analyses nécessitent l'emploi d'un étalon interne (le buthyl parabens).
En bon chimiste curieux, j'ai plein d'interrogations sur le rôle de cet étalon interne, ce qui justifie le choix d'un étalon interne, etc...

J'ai beau cherché sur le net, je ne trouve pas mon bonheur. Alors je me suis dit qu'ici peut-être...
Je suis preneur de toutes informations.

Merci d'avance. @+

[stef]

Bonjour. Alors tout d'abord GC/MS c'est chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrometrie de masse.

Ensuite, l'etalonnage interne est souvent utilisé quand on pas de répétabilité au niveau de l'injection ce qui a pour consequence des variations au niveau du signal. On aura par exemple pour 3 injections du meme produit, 3 signaux trés differents.

Donc afin d'eviter ça, on ajoute avec le produit à analysé une quantité connu d'etalon interne et au lieu de reporter la quantité de signal du produit sur la droite d'etalonnage, on reporte le rapport du signal du produit sur l'etalon interne. Et donc quel que soit la quantité injécté, ce rapport reste le même et on a donc par d'interference avec le volume injécté.

J'éspère avoir été clair.

[moco]

La hauteur d'un pic est proportionnelle au nombre de moles présent dans l'échantillon. mais pour connaître le facteur de proportionnalité, il faut ajouter une quantité connue de la substance cherchée, et refaire l'analyse.

Exemple : Imagine que l'éthanol de ton échantillon te donne un pic de 6.6 cm de haut. Admettons que tu ajoutes alors peut-être 5 micromoles d'éthanol à ton échantillon à analyser; et tu obtiens dans cette nouvelle analyse un pic de 9.6 cm. 5 micromoles d'éthanol donne un pic de 9.6 - 6.6 = 3.0 cm. Donc 1 micromole donnerait un pic de 0.6 cm. Cela veut dire que ton échantillon à analyser aura une teneur en éthanol de 6.6/0.6 = 11 micromole.

[vergui59]

Ok d'accord! Certaines choses sont plus claires maintenant!

Merci bien pour vos réponses.

[microgolgi]

La hauteur d'un pic est proportionnelle au nombre de moles présent dans l'échantillon. mais pour connaître le facteur de proportionnalité, il faut ajouter une quantité connue de la substance cherchée, et refaire l'analyse.

Exemple : Imagine que l'éthanol de ton échantillon te donne un pic de 6.6 cm de haut. Admettons que tu ajoutes alors peut-être 5 micromoles d'éthanol à ton échantillon à analyser; et tu obtiens dans cette nouvelle analyse un pic de 9.6 cm. 5 micromoles d'éthanol donne un pic de 9.6 - 6.6 = 3.0 cm. Donc 1 micromole donnerait un pic de 0.6 cm. Cela veut dire que ton échantillon à analyser aura une teneur en éthanol de 6.6/0.6 = 11 micromole.

Ton exemple se rapproche plus d'un dosage par ajout dosé que d'un étalonnage interne! non?
Pour moi l'étalonnage interne consiste à un introduire un composé dont on connait la concentration. Une fois élué, tu vas obtenir une aire pour ton étalon interne et une aire pour ton produit que tu veux doser!
Tu n'as plus qu'a faire un produit en croix pour déterminer la concentration de ton produit à doser.

[Jergal]

Pour moi l'étalonnage interne consiste à un introduire un composé dont on connait la concentration. Une fois élué, tu vas obtenir une aire pour ton étalon interne et une aire pour ton produit que tu veux doser!
Tu n'as plus qu'a faire un produit en croix pour déterminer la concentration de ton produit à doser.

J'ai fait ça en partiel. A la base, je devais faire une courbe d'étalonnage, mais je n'avais pas de règle, du coup, j'ai fait par calcul.
Ce n'est pas précis, ça donne des résultats très approximatifs, mais bon...


Je ne sais pas encore si j'ai réussi ce partiel

[Dudulle]

La méthode de moco est en effet une méthode par ajout dosé.

Le choix d'un standard interne est fait selon plusieurs considerations:

-Il ne doit pas se superposer avec un des composé présent (c'est si bête que l'on y pense pas forcement), et le composé du standard ne doit pas se trouver "naturellement" dans notre échantillon.

-Il ne doit pas réagir avec un des composé; souvent on utilise pour le standard un composé de la même famille que ce qu'on veux quantifier; si on a un mélange d'alcools on vas utiliser un alcool avec un temps de retention assez éloigné des autres produits.

-La quantité de standard introduite doit donner une aire de pic proche des aires des composés dans la fourchette de quantification voulue.

-Le standard doit être miscible avec l'échantillon.

Je vais donner un exemple simple: Si on a des échantillons de vin et que l'on désire quantifier les alcools autre que l'éthanol on vas déjà passer l'échantillon pur.
On vas alors chercher une zone qui ne contient pas de pic. Avec une colonne apolaire il y a une zone sans pic un peu après l'ethanol.

Il faut alors trouver un composé capable de sortir dans cette zone, ce qui est le cas de l'iso-propanol.

On vas alors introduire une quantité d'IPA "au pif" et essayer d'avoir des pics du même ordre de grandeur.

Une fois que l'on sait combien il vas nous falloir (par exemple 5g/l) on vas préparer une solution témoin avec des quantités connue de chacun des composé à quantifier.

Ce temoin est melangé avec la quantité de standard "adéquate", et le chromatogramme resultant vas permettre de calibrer l'instrument, ou de s'en servir pour calculer en faisant des regles de 3.

Il est également possible de préparer un témoin haut et un témoin bas (avec des petites et des grandes quantités de composés) afin d'avoir une calibration en 2 points, car la réponse du detecteur n'est pas tout à fait linéaire.

[Dudulle]

Je viens de réaliser que ce sujet date de Mathusalem; encore une victime du déterreur fou...

[Jergal]

J'avais pas remarqué la date...

[momogalou]

L'étalon interne à pour but de déterminer précisément une concentration d'un ou plusieurs composé(s) à partir de la comparaison des aires des pics correspondant(s) avec l'aire du pics d'étalon interne.

Cet étalon doit être choisi avec soin, en fonction de son temps de rétention. Il ne faut pas que l'étalon choisi, ait un même temps de rétention, ou trop proche, de celui d'un des composés à analyser, au risque qu'il soit détecté en même temps que ce même élément et qu'on ne puisse le quantifier correctement.


L'étalon interne est introduit à une concentration connue dans l'échantillon à analyser.