Hydrolyse de protéines.

[GeLe5000]

Bonjour à tous.

J'essaie d'hydrolyser des protéines suivant la méthode usuelle (dans HCl 6 M), sauf que je ne chauffe pas et que je laisse l'hydrolyse se faire pendant plusieurs jours.

Je souhaite hydrolyser de la gélatine, vu que c'est la protéine la plus pure dont je dispose (les feuilles de gélatine qu'on utilise en cuisine).

Mais je ne saurais doser ni les protéines, ni les acides aminés, ni les peptides pour évaluer la progression de l'hydrolyse.

J'ai donc décidé d'essayer d'abord l'hydrolyse de protéines du lait, avec l'idée que si l'hydrolyse finissait par être complète, j'obtiendrais, à la place du liquide blanc, une solution transparente. Alors je pourrais passer à la gélatine en comptant le même nombre de jours d'hydrolyse.

J'ai utilisé un concentré de protéines de lait de vache (+ émulsifiant, la lécithine de soja) de Nutricia (Protifar, poudre hyperprotidique) dont voici la composition, pour 100 g de poudre :

87,2 g de Protéines
1,6 g de Lipides (dont 1,2 g de saturés)
1,2 g de Sucres
0,28 g de Na, K, Cl Ca, P, Mg

A mon étonnement, après 1 ou 2 jours, le liquide blanc était devenu violet foncé.

1) Quelqu'un saurait-il quelle molécule est responsable de cette coloration ? La solution de gélatine en voie d'hydrolyse ne se colore pas, donc ce ne sont pas les acides aminés.
2) Je me demande aussi pour quelle raison les protéines du lait ont une couleur blanche, alors que la gélatine est transparente.

Merci.
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[Kemiste]

Bonjour,

Je trouve qu'il y a quelques biais dans ton protocole. Une simple observation de la solution ne pourra pas te garantir que l'hydrolyse est terminée ou qu'elle est complète. Le détermination du temps nécessaire pour l'hydrolyse d'un mélange ne pourra pas non plus te permettre de déterminer avec certitude le temps nécessaire pour l'hydrolyse d'un autre mélange.

J'avais quand même une petite question. Dans quel cadre réalises-tu ces manips ?

[GeLe5000]

Le but de la manip est de produire une solution d'acides aminés afin de voir s'il est possible de "cultiver" des protozoaires dans un milieu de culture sans bactéries (jusqu'à ce que le milieu soit contaminé, évidemment, car je n'ai pas la possibilité de travailler stérilement). Donc un milieu de culture artisanal, "fait maison", que je pourrais enrichir de vitamines, etc... comme pour une culture de cellules animales. Et avec un antibiotique contre les bactéries tant qu'on y est, si je trouve un antibiotique.
Il n'est donc pas capital que l'hydrolyse soit complète, des petits peptides ne sont pas des protéines.
Je comptais, après neutralisation avec NaOH, filtrer la solution. Je me disais que la couleur du "lait" devait disparaître et que la solution serait transparente, donc hydrolyse au moins partielle. Mais je suis tombé sur ce problème de couleur violet foncé qui me gène. Les coupables : les Sucres ? Je vais mettre du saccharose ou du glucose dans HCl pour voir.

[Kemiste]

Une hydrolyse du saccharose en milieu acide donnera du glucose et du fructose. Je ne pense pas que cette réaction seule puisse expliquer la coloration violette.

Tu parles de milieu de culture "maison", ces expériences ne sont pas réalisées au laboratoire ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[GeLe5000]

Si, elles sont réalisées en laboratoire. Et justement, je voudrais savoir à quoi on peut arriver en dehors d'un laboratoire. On peut acheter facilement un pHmètre pas trop cher, etc... Mais je voudrais connaître les limites de ce genre d'entreprise car le matériel vient vite à manquer. Un spectrophotomètre, on ne trouve pas ça facilement. Donc imagination nécessaire pour contourner les problèmes survenant du fait de l'impossibilité de faire certains dosages.

[Kemiste]

En dehors du laboratoire, tout d'abord pour des questions de sécurité, pas de manipulations, surtout avec des acides forts concentrés.

Il y a quand même quelque chose qui me "surprend". Pour des manips étant réalisées en laboratoire je trouve que tu n'as pas beaucoup de moyens. Je ne suis pas biologiste, mais penses-tu pouvoir tirer des résultats avec ces milieux de culture "maison" dans des conditions qui ne sont pas des plus optimales ?

[GeLe5000]

Pour ce qui est de l'interdiction d'utiliser des produits chimiques, j'ai lu sur un autre forum que les avis sont partagés. On pense à protéger les enfants par exemple, mais on défend aussi la liberté individuelle. Par ailleurs, une dame qui a été défigurée à l'acide par un ex-amant franchement con et méchant essaie d'obtenir l'interdiction de la vente d'acide. J'avoue que je ne sais que penser. Tant que je peux m'en procurer, n'étant ni un enfant, ni con, ni méchant, je n'ai pas de raison de me priver.

Pour les conditions optimales, il faut savoir que des protozoaires se multiplient très aisément dans de l'eau du robinet (on est loin de l'eau distillée par exemple). Et quand on pense à leur milieu naturel de plus en plus pollué dans lequel ils survivent, on peut conclure que ce sont justement des cellules qui se prêtent à des expérimentations dans des conditions peu contrôlées.

[Kemiste]

C'est un débat qu'il y a aussi déjà eu sur ce forum. La question n'est pas de savoir si on est un enfant ou non. Il est ici question de sécurité. Si les manips sont faites en laboratoire ce n'est pas pour rien. Pour la manipulation de produits chimiques il faut des installations spécifiques afin d'être protégé mais aussi de protéger les autres. Que faire chez soi en cas d'accident ? Comment stocker les produits ? Comment éliminer les déchets ? Que dire au voisin qui n'a pas demandé à être exposé ? Il n'est plus question de liberté individuelle à partir du moment où il peut y avoir des conséquences chez les autres. En tant que chimiste il ne me viendrait pas à l'idée de manipuler chez moi.

[GeLe5000]

D'accord sur le principe général s'il n'a d'autre motivation que l'altruisme . Mais ce principe restreint la recherche à une élite autorisée. Dès lors que le produit (HCl 23 %) peut être acheté dans le commerce, pour le gros nettoyage d'un sol par exemple, il manque une autorité "légale" pour dissuader de l'utiliser dans une expérience de chimie. Vos conseils sont très respectables mais ils devraient être indiqués sur le flacon. Pour la situation présente, donc en ce qui me concerne, j'ai travaillé une dizaine d'années en laboratoire donc logiquement je sais ce que je fais. A partir du moment où on a une bouteille d'acide chlorhydrique à la maison, qu'on l'utilise pour un travail ménager ou une manipulation de chimie ne fait pas de différence. Avec la nuance, il est vrai, que l'acide peut être conservé dans un flacon qui n'est pas le flacon d'origine. Donc problème possible lors de l'intervention d'un pompier par exemple en cas d'incendie. Mais il y a en tout 100 ml d'HCl transvasé dans un bocal, ce qui pourrait aussi être fait par quiconque nettoyant ses pierres. Pas de quoi effrayer un pompier. Je ne pense donc pas qu'une manipulation de chimie soit plus dangereuse que de se déplacer en voiture avec 40 litres d'essence dans le réservoir.
S'il vous est venu une idée au sujet de cette couleur violette, ça m'intéresse aussi.

[Kemiste]

D'accord sur le principe général s'il n'a d'autre motivation que l'altruisme . Mais ce principe restreint la recherche à une élite autorisée.

Je ne sais pas si on peut parler "d'élite" mais il est normal que seules les personnes ayant une connaissance théorique et pratique dans un domaine puissent exercer dans ce domaine. Ceci ne se limite pas qu'à la chimie.

Dès lors que le produit (HCl 23 %) peut être acheté dans le commerce, pour le gros nettoyage d'un sol par exemple, il manque une autorité "légale" pour dissuader de l'utiliser dans une expérience de chimie. Vos conseils sont très respectables mais ils devraient être indiqués sur le flacon. Pour la situation présente, donc en ce qui me concerne, j'ai travaillé une dizaine d'années en laboratoire donc logiquement je sais ce que je fais. A partir du moment où on a une bouteille d'acide chlorhydrique à la maison, qu'on l'utilise pour un travail ménager ou une manipulation de chimie ne fait pas de différence.

Il y a une grande différence. Il n'y a pas de risque (et encore) si on utilise un produit en respectant les conditions d'utilisation. Par contre il y a un réel risque si on l'utilise pour une réaction. Le produit peut être "transformé", régir plus ou moins violemment...

Avec la nuance, il est vrai, que l'acide peut être conservé dans un flacon qui n'est pas le flacon d'origine. Donc problème possible lors de l'intervention d'un pompier par exemple en cas d'incendie. Mais il y a en tout 100 ml d'HCl transvasé dans un bocal, ce qui pourrait aussi être fait par quiconque nettoyant ses pierres. Pas de quoi effrayer un pompier.

Il peut y avoir des problèmes avant d'en arriver à l'incendie ou à l'intervention de pompiers. Le stockage dans des récipients qui ne sont pas d'origine peut entraîner par exemple des coulures si le récipient n'est pas adapté. Il y a donc un risque de brûlure juste en saisissant le flacon. Il peut également y avoir réaction avec d'autres produits stockés, des déversements dans la nature...

Je ne pense donc pas qu'une manipulation de chimie soit plus dangereuse que de se déplacer en voiture avec 40 litres d'essence dans le réservoir.

Le fameux exemple de la voiture . Je t'assure, il y a des manipulations bien plus dangereuses que de se déplacer en voiture.

S'il vous est venu une idée au sujet de cette couleur violette, ça m'intéresse aussi.

Pas contre pas d'idée pour la couleur.

PS : pas la peine de me vouvoyer