Developpement de méthode pour HPLC

[J3nn1f3r]

Bonjour

Me voilà nouvelle sur le forum. En effet je viens d'obtenir mon premier travail, et mes premières questions arrivent.
Je suis sur le developpement d'une méthode de préparation de Standard et échantillon pour une analyse en HPLC. Je n'ai jamais fait de developpement, et je me sens un peu perdue. J'ai donc quelques questions.
Pour ce fait, je vais partir d'un protocole connu, afin de poser mes questions.

Je dois dosé un produit qui contient deux matières actives, celle que je nomerais A ( dont la MM=339.3 et la Concentration finale 75g/L) et la deuxième que je nomerais B ( MM=410.4 et concentration finale 30g/L).

Le mod'op est le suivant :

1) Préparez deux solutions de références
Peser 40mg de A et 100mg de B dans une fiole jaugée de 100mL. A joutez 80mL d'acetonitrile, passer au US et compléter au trait de jauge.
Transférer 10ml de cette solution dans une fiole jaugée de 50mL et compléter jusqu'au trait de jauge.

2)Solution échantillon
Peser entre 130 et 140mg d'echantillon dans une fiole jaugée de 50mL et compléter avec le diluant jusqu'au trait de jauge.

3) Les 2 solutions de références sont injecté 5 fois chacune et doivent avoir un RSD <1% , puis la solution echantillon est injecté.

Jusque là, rien de compliqué. Mais, mes questions sont les suivantes :
- comment est calculé ( et quel est le raisonnement ) le faite que je dois peser 40mg de A et 100mg de B ?
- comment est calculé ( et quel est le raisonnement ) le faite que je dois peser entre 130 et 140mg de la solution echantillon.

Je pense que je passe a côté de quelque chose de très facile mais je n'arrive pas à trouver les réponses à mes questions.

Merci d'avance pour vos réponses
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[J3nn1f3r]

Je me suis trompée, la MM de A est 410.4 et la MM de B est 339.3

[HarleyApril]

Bonsoir

Je suppose que c'est de la détection UV et que c'est linéaire ... Si ce n'est pas le cas, on peut transposer les explications.

Quand on a développé la méthode, on a choisi une plage où la détection était bonne. Cette plage est définie par différents paramètres (longueur d'onde et concentration). Le but est d'être à un endroit où la substance absorbe bien et où la réponse est linéaire.
On essaie également de se placer à des proportions relatives en A et B qui vont ressembler à ce qu'on aura dans les échantillons.
D'où les pesées des substances A et B.

Pour la pesée de l'échantillon, on sait en gros quel doit être le résultat. On réalise donc une pesée qui permet de se trouver dans la plage où la méthode a été démontrée linéaire.

Cordialement