[Licence (L1-L2-L3)] A propos des tampons utilisés lors de la PCR

[Marina dsf]

Ma question concerne le protocole et le rôle des différents tampons et autres qu'on ajoute.
- Protéinase K ---> Digestion des prot membranaire.
- EDTA ---> Chelateur d'ions divalents qui permet d'inhiber les nucléases
- Phénol/chloroforme ---> pour isoler l'ADN des autres compos qui passeront dans la phase orga.
- Silice ---> Qui peut remplacer le melange Phenol/chloroforme car il fixe sélectivement l'ADN en presence de fort concentration saline. Le Mg2+ permettant le pontage entre l'ADN ( - ) et la Silice ( - )

Mais par contre:
tampon AL
tampon AW1 et AW2...
SDS et Tris-HCl sont des détergents tous les deux il me semble mais ont ils les même mode d'action?

Merci d'éclairer ma lanterne s'il vous plait

[piwi]

J'ai du mal à vraiment comprendre votre question.
Que voulez vous savoir exactement?

Sinon SDS est un détergeant mais le tris n'en est pas un. C'est un tampon.

[Zellus]

Salut,

Ca ressemble plus à une extraction d'ADN qu'à une PCR ce dont tu parles mais bon. Les tampons AL, AW1 et AW2 sont sans doute les noms donnés par la société qui vous a vendu le kit de purification. Mais généralement les sociétés qui vendent ces produits n'en donnent pas la composition. Par contre il doit y avoir le rôle de ces tampons dans le "mode d'emploi" fourni avec.

[Marina dsf]

Oui voilà en fait ma question était de savoir quel rôle avaient ces différents composés lors de l'extraction d'ADN que l'on fait avant de procéder a une PCR.
Mais vous y avez répondu, ce sont simplement des tampons.

Désolée pour la mauvaise formulation de ma question

Et merci d'y avoir répondu.

[Moumoutte]

Bonjour,

oui zellus à raison, ce sont les noms donnés à des réactifs de kit d'extraction.

De mémoire, il me semble que les tampons AW1 et AW2 contiennent un sel chaotropique, le thiocyanate de guanidium (GTC) qui a la faculté de lier les acides nucléiques en milieu acide et alcoolique par adsorption sur la silice.
Le tampon AL doit être un tampon de lavage (mais pas sûr)

cordialement

[Marina dsf]

Merci beaucoup a tous !