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[Bio][M1-M2]clonage difficile.

  1. piwi

    Date d'inscription
    janvier 2005
    Localisation
    Strasbourg
    Âge
    40
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    7 852

    [Bio][M1-M2]clonage difficile.

    Je vous propose ici un petit chose pas commode.
    Le but du jeu est de parvenir à cloner l'insert proposé dans le polylinker du vecteur (région après la flèche bleue) également proposé dans le but d'exprimer la protéine de fusion dans des cellules type COS ou HeLa. Vous disposez des cDNA produits à partir du tissu exprimant votre gène. Le cDNA recherché fait 3.5 kpb

    Vous ne disposez que de peu de temps (1 semaine). Décrivez votre approche expérimentale pour satisfaire à vos objectifs.


    Cordialement,
    piwi

    -----

    Images attachées
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
     


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  2. piwi

    Date d'inscription
    janvier 2005
    Localisation
    Strasbourg
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    7 852

    Re : [Bio][M1-M2]clonage difficile.

    Un second clonage peu évident.

    Vous disposez de deux vecteurs et vous souhaitez faire passer l'insert du plasmide donneur dans le plasmide receveur. L'insert est grand, peu exprimé dans les tissus, il n'est pas question d'essayer de le sortir par PCR. Vous ne pouvez procéder que par restriction.

    Bon courage,
    piwi
    Fichiers attachés
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
     

  3. piwi

    Date d'inscription
    janvier 2005
    Localisation
    Strasbourg
    Âge
    40
    Messages
    7 852

    Re : [Bio][M1-M2]clonage difficile.

    correction d'une petite erreur dans la carte du plasmide receveur. Il n'y a pas de site SmaI entre BamHI et BglII. Ce serait bien trop facile sinon
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
     

  4. MaliciaR

    Date d'inscription
    août 2007
    Localisation
    Europe
    Messages
    3 401

    Re : [Bio][M1-M2]clonage difficile.

    Citation Envoyé par piwi Voir le message
    correction d'une petite erreur dans la carte du plasmide receveur. Il n'y a pas de site SmaI entre BamHI et BglII. Ce serait bien trop facile sinon
    Clair Mais il y en a un dans le VP16. Ca compte?
    Pff, je ne comprends pas ce qui m'arrive : je ne fais plus de manips et je me choppe à résoudre un exo clonage... C'est grave, Docteur?
    An expert is one who knows more and more about less and less.
     

  5. piwi

    Date d'inscription
    janvier 2005
    Localisation
    Strasbourg
    Âge
    40
    Messages
    7 852

    Re : [Bio][M1-M2]clonage difficile.

    Ah bah oui ca compte. J'en oublie des difficultés parfois. C'est tellement tordu de toute façon...
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
     


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