hplc c18 tres technique

[invite86cdc69d]

Bonjour !
voila, j'ai un soucis avec l'hplc,
je dois analyser de la thyroxine ( HORMONE )
J'ai une colonne c18.
j'utilise l'acetonitrile comme eluent, avec surement du tfa a 0.1 %.
la machine sur laquelle je travaille date des annees 20 ( ou presque ! )
alors je suis en isocratic ( ca se dit comme ca ?, )
mon probleme est de trouver ma bonne proportion acetonitrile/eau distille.
a ce que j'ai compris ca depend de la polarite de ma thyroxine.
chose que je n'arrive pas a trouver.
enfin c'est un peu le brouillard quoi !
help, please !

[inviteec3fafed]

J'ai trouvé dans :
A micromethod for quantitative determination of iodoamino acids in thyroglobulin
N Baudry, B Mallet, PJ Lejeune, L Vinet, and JL Franc
Journal of Endocrinology, Vol 153, Issue 1, 99-104

The procedure involves separation of monoiodotyrosine (MIT), di-iodotyrosine, tri-iodothyronine and thyroxine by reverse phase HPLC with a Vydac C18 stationary phase and a mobile phase of water-acetonitrile-acetic acid

J'ai pas accès à la publi mais tu n'as plus qu'à la trouver...

[inviteb7fede84]

Bonjour

"A C18 column with a mobile phase 80:20:0.2 methyl alcoholI waterhosphoric acid at 1mL/min gave a good separation of the l -thyroxine peak from the methyl alcohol".

Extrait de: http://www.osha-slc.gov/dts/sltc/met...17/pv2117.html

Good Luck

[invite86cdc69d]

merci shaddock, ton lien est bien....seulement j'aimerai garder mon acetonitrile et mon tfa, car j'ai deja une ebauche de methode ( mais alors vraimment une ebauche, hein, elle fait trois ligne !!! )

tu sais quoi, pluton35, la plupart des articles du journal d'endocrinology sont gratuit en ligne, sauf celui ci !.
mais bon, suis sure que vais trouver kkpart.
any other suggestion ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite86cdc69d]

aussi,
quelqu'un a une idee sur la polarite de la thyroxine , acetonitrile ?/
merci !!!

[invite51f5ee7b]

Je ne comprends pas ta question. Il n'y a aucune théorie qui permette de prédire quelle proportion d'éluant tu dois utiliser.

Le mieux n'est-il pas d'essayer ? Lance-toi !
Essaye un mélange 80-20 (acétonitrile-eau) et vois si ca sort trop tot ou trop tard...

[invite86cdc69d]

ben oui, je sais , c'est un peu flou...........
mon tfa arrive la semaine prochaine......
j'ai deja essaye sans tfa, avec un melange a peu pres 70;30.
et ben, c'est pas top.......
j'ai plein de pics de partout qui ne ressemblent meme pas a des pics, du coup j'arrive pos a identifier mon pic de thyroxine ( si il existe...) et ma baseline est merdique ( en restant poli, hein...)
alors moi, je stresse un peu parce que il faut que ma chimie soit au point dans 15 jours parce que mes grenouilles sont en train d'ovuler ( je suis pas chimiste, je bosse avec des grenouilles !!!)
et question articles scientifiques, ben il y a pas grand chose...,
alors dans l'ideal, quelqu'un qui aurait deja bosse avec avec cette hormone, ce serait parfait !
mais bon, faut pas rever, hein ?

[inviteb7fede84]

Est-ce que ta colonne est bien stabilisée, si la ligne de base part en biais..? Sinon cela pourrait aussi expliquer "les patates".

[invite51f5ee7b]

Et est-ce que tu peux sortir un bon pic avec un produit pur bien connu ?

[invite86cdc69d]

alors ma ligne de base elle est souvent penchee, mais logiquement, la colonne est stable.....
peut etre qu'elle peut bouger un peu quand j'injecte....
mais, normalement, il faut la bloquer ?
j'ai l'impression que les techniciens du labo ont plutot l'habitude de la laisser "trainer" comme elle est," tant pis si elle n'est pas posee completement a plat !"
c'est vrai que je n'ai pas essaye avec un autre compose que la thyroxine....mais, pour l'instant je bosse avec les standards, j'en suis pas encore aux echantillons,
donc dans ce que j'injecte, il n'y a que de l'eau distille, de la thyroxine qui a ete "dissoute" grace a de l'hydroxide de sodium,
mais pour mes prochains standards je pense diluer avec un melange d'acetonitrile/eau distille,
suppose marcher mieux, non ?

quand a mes echantillons, c'est de l'eau du robinet filtree, avec la thyroxine et toute les cochoneries que mes tetards peuvent rejeter,,......

je me souviens un des techniciens dire que l'hydroxide de sodium, peut provoquer un precipite dans la colonne, et peut la bloquer.
il est vrai que lors de ma derniere experience qui impliquait de l'acide iopanoique, dissous lui aussi avec l'hydroxide de sodium, la colonne s'est bloque et il a fallu la nettoyer " a l'envers "
avec du methanol, si je me souviens bien.....
quelqu'un peut confirmer ?

cheers !

[invite42d02bd0]

bete question, mais avec NaOH, tu fais des ions, ta colonne est apolaire? au sinon ca reste coincé dessus