Digestion avec la papaïne

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Bonjour à tous,

Dans un protocole expérimental pour faire une digestion d'IgG avec de la mecuri-papaïne, j'ai remarqué qu'on ajoute
2µL d'EDTA et 4µL de Cystéine
Je me posais des questions quand à l'utilité de ces réactifs :

- Je sais que l'EDTA est un chélateur d'ions divalents qui permet d'inactiver les protéines ayant besoin d'ions pour être actives, mais quelles protéines (d'autres protéases que la papaine?
- La cystéine libère le site actif de la papaine et envelant le mercure qui le bloquait, est ce juste ?

Merci pour vos éclaircissements à venir ^^

[inviteb43bbd89]

Mécanisme:
La triade catalytique active la cystéine.
La cysteine attaque la liason peptidique.
L'état de transition est stabilisé par l'azote de la chaine latérale de Gln
L'histidine protonnée transfert son proton à l'azote de la chaine principale, ce qui libère la partie C-term.
On a la formation d'un intermédiaire thio enzyme
L'histidine active une molécule d'eau qui attaque l'intermédiaire thio-enzyme.
La cystéine catalytique est sensible l'oxygène
La papaine sera activé par :
les agent réducteur de type b-mercapto-éthanol par l'EDTA qui évite que des cations inhibent la cysteine