Bonjour du soir, espoir,
Ben en fait, je parlais de disrupter la copie endogène du gène d'intérêt, pour que les facteurs de régulation ciblent notre construction et uniquement celle-ci (genre : pas de compétition?)... Ou bien la copie endogène du gène rapporteur afin d'être sûre que l'activité observée soit bien dûe à notre construction et pas à une activité native (ça c'est déjà un peu plus logique, non? bien qu'il soit bien sûr plus simple d'utiliser une souche déjà mutée sur le gène rapporteur...).
Pour que l'insertion soit stable, comment tu fais si tu ne maintiens pas la pression de sélection notamment dans le cas d'insertion via des transposases? J'arrive à comprendre qu'une insertion via un plasmide vecteur et recombinaison homologue reste stable, mais le propre de l'élément transposable n'est-il pas justement de transposer? La cellule a t-elle intérêt à maintenir une insertion qui ne lui apporte rien? (c'est un peu finaliste comme question, mais c'est vrai: une construction portant une fusion de gènes constitue plutôt un fardeau métabolique pour la cellule si elle ne porte pas de gène lui servant réellement à quelque chose...).
Et sais-tu "comment obtenir une fusion fonctionnelle dans le cas d'une insertion aléatoire et fréquence d'obtention"? En fait, je ne comprends pas très bien comment le site d'insertion peut altérer le fonctionnement de la construction! A part dans le cas de l'insertion dont tu parlais, mais je suis chez une bactérie, et donc pas de télomère! Au secours!!!!!!!

Merci d'avance,
Cécilus

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"le ciel écrit avec des lignes d'or, en caractère distincts, les évènements de nos vies" Calderon, La vie est un songe