salut a tous ,,,
MUC1 est une glycoproteines de la familles des mucines ,,, et elle à un taux elevé dans les cellules canceruse ,, certain livres disent quelle intervient dans l'anti-adhesion ! plus y'en à ,,, moins les cellules adhères ,,,, donc ma questions ,,, quelle est le substrat ou le support sue le quelle MUC1 adhère le mieux ??
Bonjour,
En soit, MUC1 ne semble pas être une molécule d'adhésion. Son role est encore mal compris mais l'hypothèse avancée actuellement est la suivante.
Dans les cellules il existe des molécules dynamiques qui permettent l'adhésion intercellulaires, c'est ce qui forme le cytosquelette. Parmis ces molécules on trouve les molécules d'actine. Ces molécules s'organisent en filaments stabilisés par une autre molécule appelée la beta-cathénine. On sait aujourd'hui que MUC1 interagit avec cette béta-cathénine. Donc plus vous avez de MUC1 plus vous déplacez la beta-cathénine. Plus vous déplacez la beta-cathénine, plus vous déstabilisez les filaments d'actine. Et enfin, plus vous destabilisez les filaments d'actine, plus vous destabilisez les jonctions intercellulaires.
Ainsi, un exces de MUC1 conduit à destabiliser les epithéliums et à liberer les cellules cancereuses.
Cordialement,
piwi
Merci bcp ,,, je voudrais monté un projet en utilisant MUC1 comme cible ,,, dans un premier temps ,, est-que des cellules CHO pourrait exprimer la MUC1 ,,, si c'est possible ,, ça pourrait me donner un modèle cancereux ,,, je voulais essayé de changer (casser) les sucres sur la proteines ou certains d'entre eux avec des glycohydrolases ,, afin de voir la differences dans l'adhesion entres cellules tumorales et normales ,, également essayé de inhiber la synthèse de l'O-glycosylation ,, pour voir les efets ,, je pense que sa conduira à une appoptose dans les cellules normales ,, mais je sais pas ce qui va se passer au niveau des cellules canceruse ,, également j'ai trouvé dans un livre ,, que MUC1 pourrait intervenir dans la transduction du signale ! ce qui pourrait me faire des manipulations de plus ,,, donc la question principales est : est que CHO exprime MUC1 ,,, j'ai vu qu'il ont réussi a en exprimer Beaucoup en Germany dans CHO-K1 ,, pour faire des experiences sur MUC1 même pour étudier un noveau vaccin pour le cancer ! ils ont réussi en mettant une proteine de fusion ou y'avait la MUC1 et la murine IGG-Fc !! enfin c'est un petit peu compliqué mais interessant ,, alors est que mon seul modèle cancereux est valable ou pas ??
Je suis un peu surpris de voir que vous avez 19 ans et que vous voulez monter un tel projet.
Juste par curiosité, vous voulez le réaliser ou c'est pour un devoir?
Comme je vous l'ai dis, le role de MUC1 dans le cancer reste obscure. Reste que cette molécule est exprimée dans les cellules epithéliales et en particulier dans les cellules glandulaires. J'ai peur qu'une cellule CHO ne l'exprime pas. Ceci dit vous pouvez toujours la surexprimer via un vecteur d'expression et voir ce que cela donne. De mémoire, le problème des cellules CHO c'est que ce sont des sacs. Elles n'expriment plus que les choses minimales pour vivre. Il n'est pas dit qu'avec ce modèle vous parvenier à réveler toutes les interactions de CHO avec les composants cellulaires exprimés in vivo ou tout du moins, dans des cultures primaires.
Je ne suis pas non plus certain qu'inhiber l'o-glycolysation soit interessant. Je vois son interet ainsi. On a ce fameux MUC1 surexprimé dans 90% des cancers. Il est donc intéressant de très bien connaitre son domaine extra-cellulaire afin de developper des traitements, et en particulier un vaccin, ciblant les cellules cancereuses via cette molécule.
Le fait de modifier l'état de glycosylation, surtout sur des cellules en culture, ne devrait pas avoir d'effet sur la proliferation attendu que c'est le domaine intra-cellulaire qui semble être en cause dans cette dérégulation.
Ceci nous ramène à la transduction du signal. J'ai deja mentionné beta-cathénine. En plus de stabiliser le reseau de micor filament d'actine, cette molécule est un transactivateur de l'expression de gènes!
On a noté aussi que MUC1 pouvait aussi interagir avec ErbB (voie des MAPK), aussi avec GSK3 (voie wnt à laquelle appartient aussi beta-cathénine.) et probablement d'autres. Il semble donc que MUC1 joue effectivement un rôle dans la proliferation en activant diverses voies de signalisation. Il est connu qu'une cellule, pour se diviser, se détache dans l'epithelium.
Vous pourriez donc avoir un double mécanisme d'inhibition de l'adhésion cellulaire.
1. séquestration de beta-cathénine et destabilisation du reseau de micorfilaments d'actine.
2. activation de la proliferation en activant diverses voies de signalisation.
Voilà un peu comment je vois les choses. Mais je ne suis plus assez les développements en cancero pour pouvoir prétendre avoir toutes les cles pour juger votre modèle.
Cordialement,
piwi
Re-merci bcp pour toute les infos ,,, c'est vrai que j'ai seulement 19 ans ,,, mais ce projet est Mon bilan de compétences expirementales ,,, en faite ,, j'ai choisit le thème des glycoproteines ,, et j'ai essayé entre-autres de commencer à monter mon projet a propos de MUC1 ,,, j'avoue que je ne suis pas encore familliarisé avec toute les technique de labo ,,, donc je sais pas trop si je pourrai arriver a exprimer MUC1 dans les CHO ,,, neanmoins ,, je pourrais tjr travailler sur mes cellules normales ,, et voir dans differents cas l'état d'adhesion des cellules ,,,
Merci bcp
Salut,
Personnellement je ne connais pas les Muc1, mais en lisant ce que vous avez écrit, est ce que ces Muc1 sont responsable du cancer, ou des métastases, parce que si on parle de jonction entre les cellules je déduis que les cellules se détachent et migrent plus facilement. Donc ma question, est ce qu'on trouve le taux de Muc1 élevé dans toutes les cellules cancéreuses ou est ce spécifiques a celles qui finissent par migrer?
Merci d'avance
Au plaisir
Jess
PS: Je suis aussi impréssionnée par une préparation d'un tel projet a ton âge, bon courage.
Les Muc1 ne sont pas directement responsable des cancers de tout genre ,,,, on ne connait pas encore l'effet quelle à dans les cellules cancerigènes ,,, mais on à observé que la plupart des cellules de certains cancer telle cancer du sein ,, est extrement abondante ,,,, donc revnons a l'adhesion des cellules ,,, comme piwi l'a expliqué ,, ce n'est qu'une hypthèse ,,, donc on n'est pas sur que elle entre en jeu dans l'anti adhesion a 100% ,,, mais considerant la grande taille de cette glycoproteines et les mechanismes que piwi a expliqué ,, pourrait jouer un rôle ,,,,,,
Je pourrais plutot dire que un mauvais fonctionnement de P53 dans la cellule induira quelle n'entre pas en apoptose et quelle forme un cancer ,, mais bon ,, je m'y connais pas tro au niveau cancer ,,, par contre on peut retrouver MUC1 dans plusieurs type cellulaire :
- cellule epitheliales glandulaire ---> glandes mammaires
-pancreas
-bronchies
-glandes salivaires
-prostate
- uterus
- sur la surface luminale des venules post-cappillaires des ganglions lymphatiques
Mais pas dans les Cellule CHO
Si j'ai dit qqc de faux ,,, qu'on me corrige!! stp
Bon me revoila avec d'autres questions ,,,, j'ai trouvé 2 methodes pour purifier MUC1 ,, la premiére serais de traiter les cellules par détergent ,,, ( lequel ? ) faire une chromato a échanges d'ions ,, et ensuite une chromato a phase réversible ,,, ( y'a t'il des quatité specifques ,, ou des substances spécifiques pour faire ces méthodes pour MUC1)
Biensur ,, pour faire un control positive a cette methodes ,, je pourrais faire un western blot ,, mais je devrais utilisé 1 ou 2 anticorps ,,( lequelles) l'autre methode ,, serais de de traiter mes lysat de cellules avec des traitements pour pouvoir a la fin arriver a faire seulement une chromato d'exclusion ,,, et bien sur mon control pourras rester le meme ,, les traitements primaire ,, sont FLOU ! donc dans un premier temps ,,, avez vous d'autres idées ,,, pour purifier et quantifier MUC1 ,,,, et combien de temp chaque manip ,, ou methode prendra ,, sachant que j'ai seulement 50h dans le labo ,, je devrais arriver a un resultat a la fin ,,,
dans un second temps ,,, les cellules a MUC1 ,, doivent pousser sur un substrat spécial ,, enfin mes tuteurs ,, mon demandées a quelle type de support MUC1 adhère ,,,, j'arrive pas tro a visualiser la question ,, ,,,
en considerant ,, que je choisit des CHO-K1 ,, et que j'ai la possibilté de faire une transfection pour quelle arrive a exprimer le MUC1 ,,, quelle methodes de transfection vous me conseillait ,, par liposomes ,, par le phosphate de calcium ,, ou autres ,,, ( pouvez me dire combien de temps pour chaque methode)
et si je prend les CHO_K1 ,, comme type de cellules canceruese ,,, il me faut bien des cellules normales d'ovaires d'ahmster ,, pour faire mon control ,, cela dit ,, les cellules ovariennes n'expriment pas MUC1 ,,, donc je devrai également faire une transfection ?
au final ,, en considerant que toute mes manipulations sont possibles ,, il me faut que je teste l'adhesion des cellules CHO-K1 entre elle par rapport au taux de MUC1 ,,, et des Cellules normales entre elles par rapport au taux de MUC1 ,,, et également entre les cellules CHO-K1 et les cellules normales ! y'a til des methodes pour voir te taux d'adhesion les cellules ,,, et toujours ,, combien de temps ça pourras me prendre ,,,, de plus ,, je pense que il y'a des inhibiteurs spéciale de MUC1 ,, ? lequels ,,,
et dans tout les ouvrages ue j'ai vu ,, on m'indiques pas bien les "sucres" accrocher a la chaine peptidique de MUC1 ,,, donc je n'arriverais pas a voir les glycohydrolases que j'utilise ! avez vous une idée !!
merci a l'avance ,, j'avoue que je commence a avoir des doutes sur la possibilité de mon projet ,,, car je pense c'est au niveau du tps que ca va bugger ! mais bon ,, j'ai toujours éspoir
Vous avez combien de temps pour faire ca? Quelle budget?
Vous connaissez exactement toutes ces techniques?
Je réalise mal votre niveau d'étude en fait. Parce que, en partant sur un niveau licence, j'ai l'impression que c'est totalement irréalisable.
Cordialement,
piwi
on m'a pas preciser le budget ,,,, et je n'ai que 50h dans le labo pour faire mes manipulations ,,,,, j'ai dans les 1 mois et demi pour préparer " théoriquement" mes manipulations ,,et mes protocoles ,,, et c'est vraie que la pluparts des methodes utilisée sont Nouvelles pour moi ,,, je sais que ça parrait irréalisable ,, dailleurs j'ai des doutes a propos de mon projet ,, c'est pour cela que je vous demande de l'aide ,,, afin de changer un petit peu l'idée des manipulation ,, j'ai une autre idée plus basique en tete ,,, qui serais de travailler sur des cellules épitheliales et des Escherichia Coli ,,, toujours au niveau de MUC1 ,,, je n'aurais pas besoin de faire les transfections ,,, et je pense que j'aurais le tps de voir un petit peu l'adhesion de ces cellules par rapport a MUC1 !! mais ,, je serais serais tré reconnaissant si vous pouvez me donner quelques réponses des questions précedentes ,,,, svp
cordialement
50 heures ça n'est pas une semaine de travail au labo. Vous n'y arriverez normalement pas étant donné que tout ne marche jamais comme prévu et qu'il va vous falloir un peu de mise au point.
Je ne sais pas trop quoi vous dire... Personnellement j'aurais tendance à penser qu'il vous faut trouver quelque chose de moins ambitieux. Mais en même temps je ne vois toujours pas dans quelles études vous êtes lancés. Votre niveau semble élevé. Je pars sur la base d'un étudiant en licence mais j'en doute.
En 50h je vois mal comment vous allez faire votre construction, transfecter et analyser les résultats! Je me laisse le temps de réfléchir un peu à comment réduire votre problématique.
Cordialement,
piwi
Je suis bien en L2 ,,, et j'ai un niveau licence ,,,, pour ma problematique ,,, je voulais mettre en evidence le rôle de MUC1 ,, dans l'adhesion cellulaire ,,, je me suis dit qu'une cellule cancereuse pourrait etre efficace pour mieux le montrer ,, comme c'est dit que les cellules canceruse surexpriment MUC1 ,,,, cela-dit CHO nexpriment pas MUC1 ,, donc je constate de la disscussion que je ne pourrait pas mettre en evidence le ROle de MUC1 en utilisant CHO-K1 dans mes 50h de labo ,,, donc je me dit en ce moment là ,,, si par exemple ,, jutilise des cellule épitheliales glandulaire mammaires de souris ,, et que d'un coté ,, je vois l'adhesion des cellules normales par rapport au tau de MUC1 ,,, et de l'autre coté jutilise des inhibiteurs de MUC1 ,, et je regarde également l'adehsion par rapport au taux de MUC1 ,,, cela pourrait entre autre mettre en evidence le role ! je pourrais également essayer de bloquer les Betha-cathènine ,, pour voir les effets ,, en tous les cas ,, tout ca reste de la théorie !
mais ,, dans tout les cas il yauras des tests pour voir l'adhesion des cellules ,,,, quelle sont ses tests ,,,, et a quelle substrat MUC1 adhère le mieux ,,, en considerant qu'il y'en à un ,,, si y'en à pas comme ca reste une théorie !!,, je devrai essayer plein de substrat differents ,, Que Faire !! mais un truc qui cloche ,, c'est qui si il n'ya pas de substrat spécifique sur lequel MUC1 adhère ,, comment ils ont pu dire que quans y'en a trop ,, ça adhère moins !soit je m'embrouille tout seul ,,, soit je ne visualise pas bien lidée de test pour voir l'adhesion ,, j'ai meme pas une image de ce que ca peut representer !!!
Y a quelqun
est que quelqu'un à une idée pour inhiber la sythése de Muc1 ,,, sans que sa fasse tro de dégat au niveau de la cellule ??
Salut,Envoyé par N.Q.
inhiber la synthèse je ne sais pas, mais peut erte peux tu envisager de bloquer son exportation à la membrane avec un truc type brefeldine A.
Bon courage
merci ,,,, je pensais aussi a inhiber la O-glycosylation?
En 50 heures, franchement tu ne peut pas faire énormément de truc. Si tu part sur deux transfections, tu peux déjà te dire que 50 heures vont partir. Et puis il y aura intérêt que des techniciens ou thésards autour de toi ait déjà l'habitude du sujet et du protocole exact car la mise au point d'un protocole efficace demande vite un mois, c'est la recherche! Donc en admettant que tu puisses faire deux transfections en 50 heures, ce qui est le rythme de quelqu'un habitué, tu n'auras que très peu de résultats, en tout cas pas autant de résultats que tout ce que tu envisages de faire! Tes ambitions devrait plutôt s'étaler sur 3 mois de stage, et même si tu veux absolument tout faire, c'est carrément une thèse qu'il te faut
PS : quand je dis deux transfections, je parle de deux résultats basés sur deux transfections différentes, la seconde étant basée sur les résultats de la première.
c'est pour cela que j'ai laissé tombé mon modéle CHO-K1 ,,, parceque j'ai vu que ca va me prendre un temp fou pour faire les transfection ,, je me suis decider a faire avec des cellules normales ,, en ajoutan un inhibiteur de muc1 dans une des cultures cellulaire ,, et puis essayer de faire des elispot sur plusieurs type de molécules d'adhesion , ,, et puis en utilisant des anti-muc1 ,, j'espere arriver a des résultat qui peuvent faire un rapport ! :d merci
