Ce-esi-ms

[invite6d61fab6]

bonjour,
je dois analyser une publication qui couplage: électrophorèse capillaire-ionisation electrosray-spectro de masse.
est ce que quelqu'un pourrait me dire en quelques ligne en quoi ça conciste cette technique
merci
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[Vinc]

Salut!
C'est la technique d'electrospray ionisation qui permet de mettre des protéines en phase gazeuse pour pouvoir ensuite faire une spectro de masse et séquencer ces protéines. La spectro d emasse nescesite d'avoir les protéines à étudier, sous forme gazeuse.
En deux mots, on solubilise les protéines dans des micros goutelettes de liquide de manière à avoir statistiquement une protéine par micro goutelette de liquide. Ensuite on fait passer un fort champs électrique qui va évaporer instantanément l'eau et on va se retrouver avec les protéines sous forme gazeuse.

A+
Vinc

[invite6d61fab6]

en fait dans ma publication on parle de sucres ça marche pareil!

[invite6d61fab6]

merci
mais je ne comprends pas à quoi ça sertde rajouter une CE devant ESI et MS

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite5351d78c]

Salut!

Souvent pour les sucres, on dérivatise par du DMSO pour les fonctions alcools secondaires (-CHOH) et avec de l'acide méthanoïque pour les fonctions alcools primaires (CH2OH). On a donc méthylation des OH et acétylation des CH2OH. Cela facilite l'interprétation de la MS grace aux incréments de masse caractéristiques. En plus les groupements méthyls et acétyls facilitent l'évaporation des sucres lors de l'ESI. L'électro capillaire est là pourquoi d'après toi....? A part la purification et la séparation des différentes espèces de sucres du mélange analysé, je ne vois pas qu'est-ce qu'elle peut faire d'autre. Les sucres séparés sont ensuite analysés grace à la MS, grâce à leur profil de fragmentation, et c'est pas du gateau car avec un seul sucre c'est très dur, alors avec plusieurs....je le leur laisse!!

[inviteb1edec27]

La spectro de masse est uniquement un système de détection. L'electrophorèse capillaire est, elle, une méthode de séparation.

[invite6d61fab6]

ok!!merci
je viens de voir un doc sur net qui parle de CE
là j'ai une autre question:
il faut se baser sur quelles proriétés des sucres pour les séparer ?
dans ma publi, j'ai un enchainement de 7 sucres il faut avant l'anlayse faire agir une enzyme pour avoir des oses simples? dans la publi ils l'en parlent pas!!!!!

[invite5351d78c]

Non au contraire, il ne faut surtout pas les hydrolyser!!! En effet, lors de la méthylation/acétylation, les OH impliqués dans une liaison osidique ne seront pas dérivatisés...et cela se verra sur la MS, tu pourras donc voir les positions des différents sucres, leur enchainement et leur branchements.

Sur EC, c'est toujours pareil, on sépare par rapport à la charge de la molécule, renseigne toi sur l'EC et tu comprendras. Sinon sur chromato, on peut les séparer selon leur polarité donc phase directe ou inverse. Pour les purifier, la DEAE-dextran est la mieux car les protéines restent attachées, les glucides sont éluées car globalement neutres, en tout cas plus que les protéines. Après y a plein de solution comme la dialyse, la chromato d'exclusion,........il en manque pas, ça dépend ce qu'on veut faire..

[invite6d61fab6]

merci merci!!!!!