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Pb avec l'intensité des bandes colorées en électrophorèse



  1. #1
    tite_toile

    Pb avec l'intensité des bandes colorées en électrophorèse


    ------

    Bonjour à tous!

    J'ai un problème de biochimie à faire et je bloque un peu le but est de comparer 2 méthodes utilisées pour purifier une protéine sérique.
    Méthode 1: précipitation sélective puis contrôle de la pureté par électrophorèse en gel de polyacrylamide.
    Méthode 2: dialyse puis chromatographie echangeuse d'ions controle de pureté par lê m^me type d'électrophorèse.
    Pour chaque méthode je dois calculer la quantité de protéine voulue obtenue et les pertes survenues au cours de la purif (sachant que je connais la quantité initiale).

    En fait je bloque sur l'électrophorèse révélée on trouve des bandes dont l'intensité représente 6 et 8% de celle de la bande principale.Pour faire l'électrophorèse j'ai utilisé 1mg.
    Je voudrais savoir si mon raisonnement est bon
    le % correspond-il à un rapport poids volume??
    Dans mon échantillon purifié j'ai donc 86% de la protéine voulue
    86mg pour 1mg donc pour 750mg on a x mg
    Ce raisonnement me semble logique mais je ne suis pas sûre.J'espère avoir été assez claire.Merci de votre aide d'avance!

    -----

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  3. #2
    Yoyo
    coresponsable des forums

    Re : Pb avec l'intensité des bandes colorées en électrophorèse

    salut

    je comprends pas trop d'ou tu sorts ton 86%
    mais si tu as deposé 1mg sur ton gel et que ta proteine represente 86% des proteines totales de ton echantillon alors tu as déposé 0,86mg de ta proteine pas 86mg!!!

    Yoyo

  4. #3
    tite_toile

    Re : Pb avec l'intensité des bandes colorées en électrophorèse

    Oui effectivement j'ai mal tapé c'est 0,86 mg
    pour les 86% c'est parce que mes autres bandes sont à 6 et 8% ce qui fait qu'elles représentent ensemble 14%
    Donc dans l'echantillon j'ai 86% de la protéine recherchée et 14 % d'autres choses
    Est que les % correspondent à un rapport poids volume??

  5. #4
    chichery

    Re : Pb avec l'intensité des bandes colorées en électrophorèse

    salut à toi ! J'ai le même exercice que toi à faire et moi je bloque sur la deuxième méthode à savoir la chromatographie échangeuse d'ions. te sers tu de la valeur de l'absorbance à 280nm pour calculer le poids de fétuine utilisé pour l'électrophorèse?

  6. A voir en vidéo sur Futura

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