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Dosage des ARN à l'orcinol



  1. #1
    BeforeDaylight

    Dosage des ARN à l'orcinol


    ------

    Pour évaluer ma concentration en ARN de levure que j'ai extrait, j'ai utilisé 2 méthodes :
    - spectrophotométrie = dosage direct, évaluation des proportions ARN/protéines
    - orcinol = dosage indirect par dosage des pentoses libérés lors de la réaction de Bial.

    Le problème, c'est que je trouve des résultats très différents pour mes 2 méthodes.
    Or, j'ai lu sur des sites anglais que la réaction de Bial en milieu acide ne libérait que les pentoses liés aux purines, pas aux pyrimidines, et que donc il fallait - en supposant un ratio pyrimidine/purine de 1 dans l'ARN - multiplier par 2 les résultats obtenus avec ce dosage pour obtenir la concentration réelle.

    Est-ce vrai ? Je ne l'ai lu que sur des sites en anglais, rien trouvé en français, et cela expliquerait mes résultats. Mais on ne me l'a pas expliqué en TP, je trouve ça d'autant plus bizarre

    -----
    Dernière modification par piwi ; 02/03/2008 à 14h42.

  2. #2
    jmbowie

    Re : Dosage des ARN à l'orcinol

    Je ne connaissais pas le dosage à l'orcinol. En multipliant par 2 , obtient-tu une concentration plus proche de ton dosage spectro?

  3. #3
    BeforeDaylight

    Re : Dosage des ARN à l'orcinol

    Oui, j'obtiens des résultats qui se rapprochent ! Pas exactement les mêmes (environ 15% inférieurs), mais je peux les expliquer par le ratio purines/pyrimidine inférieur à 1. Je voudrais juste être sûre que ma démarche est bonne

  4. #4
    gorben

    Re : Dosage des ARN à l'orcinol

    Salut,

    Je ne connais pas la methode de dosage a l'orcinol. Mais s'il est vrai que ca ne dose que les purines, fait attention au GC% de ton organisme pour tes calculs.

    A+

    Edit : Arf trop tard. Oui en theorie tu as le bon raisonnement !

  5. A voir en vidéo sur Futura
  6. #5
    piwi

    Re : Dosage des ARN à l'orcinol

    Pourquoi le ration purine/pyrimidine serait il de 1 dans les ARN? Ceci ne vaut que pour l'ADN double brin. Il faudrait retrouver le tableau avec les %CG en fonction des organismes (je l'ai pas retrouvé en cherchouillant vite fait sur le net). Maintenant il faut aussi tenir compte du fait que le dosage spectro n'est pas une méthode de dosage absolument précise avec les appareils classiques. Donc tu peux avoir une erreur systématique à ce niveau là qui expliquerait un écart.

    Cordialement,
    piwi

  7. #6
    jmbowie

    Re : Dosage des ARN à l'orcinol

    Citation Envoyé par gorben Voir le message
    Salut,

    Je ne connais pas la methode de dosage a l'orcinol. Mais s'il est vrai que ca ne dose que les purines, fait attention au GC% de ton organisme pour tes calculs.

    A+

    Edit : Arf trop tard. Oui en theorie tu as le bon raisonnement !
    Rien à voir!
    Je rappelle que chaque paire de base est l'association d'une purine (A ou G) avec une pyrimidine (C ou T). A ne pas confondre avec les appariements les plus énergétiques (C-G).

  8. #7
    BeforeDaylight

    Re : Dosage des ARN à l'orcinol

    Citation Envoyé par jmbowie Voir le message
    Rien à voir!
    Je rappelle que chaque paire de base est l'association d'une purine (A ou G) avec une pyrimidine (C ou T). A ne pas confondre avec les appariements les plus énergétiques (C-G).
    Je sais bien
    Je travaille sur des ARN, ils sont donc simples brins, donc pas de problème d'appariement de bases.

    J'estime juste que statistiquement, il y a autant de bases puriques que pyrimidiques dans un ARN, comme on peut estimer qu'ils y a autant de femmes que d'hommes dans une population. Or ce n'est pas forcément le cas, ce qui peut expliquer mes résultats

  9. #8
    ramia

    Re : Dosage des ARN à l'orcinol

    Bonjour,

    J'ai un TP à rédiger sur le dosage des ARN de levure à l'orcinol.
    J'ai fait une gamme étalon + 2 tubes d'ARN, l'un dilué à 1/2 l'autre, non dilué.
    Je fait des absorbances à 665 nm.
    J'ai calculé la teneur d'ARN.
    Je trouve des valeurs très supérieurs à celle trouvé lors du dosage colorimétrique? Est-ce normal?
    Connaissez-vous des sites où on explique ce tp? Merci

  10. #9
    zelda_976

    Re : Dosage des ARN à l'orcinol

    Euh, vous me dirais si je me trompe, mais bon, comme je dois en ce moment même rédiger un TP du même genre que le tiens, le sujet du dosage pas l'orcinol m'intéresse.

    Donc, j'ai une remarque à faire : ta gamme étalon, si tu l'a faite avec l'ARN commerciale de levure, il n'y a pas de différence dans le rapprot C G, ton absorbance est proportionnelle à ta concentration. Il y aurait un soucis seulement si l'ARN de ta gamme vient d'une espèce différente de la levure dont tu doses l'ARN.

    Donc, si tu a une différence concentration avec tes 2 dosages (spectro et colorimétrique), c'est surement du au fait que le dosage spectophotométrique (a 260nm) est moins précis a mon avis.

    Je dit ca car moi, je trouve un résultat meilleur avec l'orcinol.

    Voila, surtout n'hésitez pas à me corriger si j'ai dit des bêtises.

  11. #10
    soileil

    Re : Dosage des ARN à l'orcinol

    les deux dosages me donnent des résultats sensiblement équivalent pour ma par. A cela près que l'orcinol et le cholure de fer revel tous les pentoses ...

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