Mapk P38
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Mapk P38



  1. #1
    invite4cf29828

    Lightbulb Mapk P38


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    Hello est ce que quelqu'un a déjà essayé de différencier par un Western la protéine P38 et cette même prot sous forme phosphorylée ? En gros est ce que je peux mettre mes deux anticorps primaires en même temps et voir apparaître 2 bandes ? Je fais des gels d'électrophorèse à 12%, est ce que la résolution est assez forte ??
    Merci pour vos réponses !

    Lauranna

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  2. #2
    zwitterion

    Re : Mapk P38

    Euh, à mon avis, ils doivent migrer au même endroit (sauf shift du à je ne sais quoi...). Tu peux toujours mettre d'abord l'anti phospho, révéler, et ensuite laver quelques heures ta membrane avant de rajouter ton anti p38 (tu peux faire un contrôle négatif pour vérifier qu'il n'y a alors plus de signal) et de le réveler ...

  3. #3
    Yoyo

    Re : Mapk P38

    Salut,

    Si ta proteine est multiphosphorylée oui tu peux faire ca, normalement les proteines phosphorylées migrant plus lentement tu observera des bandes superieures. Il faut etre sur que les bandes inferieures ne sont pas des produits de degradation (donc un témoin traité a la phosphatase alcaline est essentiel).
    Sinon tu fais l'experience séparément tu as juste a couper ta membrane en deux avant d'incuber avec les anticorps, c'est toujours le plus prudent.

    Yoyo

  4. #4
    invited8287251

    Re : Mapk P38

    Citation Envoyé par Yoyo
    Salut,

    Si ta proteine est multiphosphorylée oui tu peux faire ca, normalement les proteines phosphorylées migrant plus lentement tu observera des bandes superieures. Il faut etre sur que les bandes inferieures ne sont pas des produits de degradation (donc un témoin traité a la phosphatase alcaline est essentiel).
    Sinon tu fais l'experience séparément tu as juste a couper ta membrane en deux avant d'incuber avec les anticorps, c'est toujours le plus prudent.

    Yoyo
    Yes!!!
    (mais je comprends pas pourquoi la question est posée vu le nombre de papiers réalisés sur p38 quelque soit le modèle!)

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