Densité optique ?

[invitef39b2034]

Bonjour tout le monde ;

Dans un TP de biochimie intitulé « effet de la température et du pH sur l’activité béta-gal » on a fait une étude de la stabilité de l’enzyme vis à vis de la température :
Test d’activité :
1) traitement thermique de l’enzyme : incubation pd 30 min à différente température (4, 25, 30, 40, 60, 80 °C)
2) on ajoute à chaque préparation du substrat ONPG et du Tp A
3) On fait à chaque préparation une incubation à 40°C pd 10 min et on ajoute du Tp Carbonate pour arrêter la réaction et on mesure la densité optique à 420 nm

Pour 4°C --> D.O. = 0.714
Pour 25°C --> D.O. = 0.711
Pour 30°C --> D.O. = 0.709
Pour 40°C --> D.O. = 0.710
Pour 60°C --> D.O. = 0.095
Pour 80°C --> D.O. = 0.025

Pourquoi la D.O. maximale est celle à 4°C ? car à mon avis la D.O. maximale doit être à 40°C car c’est la température optimale pour l’activité enzymatique de l’enzyme béta-gal

Merci d’avance
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[invite217f3aaa]

Salut,

Pourquoi la D.O. maximale est celle à 4°C ?

Dans un 1 er temps il faut tenir compte des souces d'erreur potentielles faisant varier la DO, quantifier l'incertitude. Ce que je veux dire c'est qu'à mon sens il n'y a pas de différence significative entre une DO =0.714 et une autre DO =0.710.
Je pense qu'il suffit de se demander dans quel organisme trouve t'on cette enzyme et est ce cohérent avec les résultat obtenues.

Cordialement,

[Jean.Marc]

Bonjour,
c'est aussi ce que je pense :
Une différence de 0.001 DO est très petite et les photomètres ne sont pas précis à ce point pour la plupart.
En fait les 4 premières mesures sont identiques au bruit près ; en revanche, à des températures plus élevées, on constate une chute importante de la DO.

[invitee863e61a]

Bonjour tout le monde ;

Dans un TP de biochimie intitulé « effet de la température et du pH sur l’activité béta-gal » on a fait une étude de la stabilité de l’enzyme vis à vis de la température :
Test d’activité :
1) traitement thermique de l’enzyme : incubation pd 30 min à différente température (4, 25, 30, 40, 60, 80 °C)
2) on ajoute à chaque préparation du substrat ONPG et du Tp A
3) On fait à chaque préparation une incubation à 40°C pd 10 min et on ajoute du Tp Carbonate pour arrêter la réaction et on mesure la densité optique à 420 nm

Pour 4°C --> D.O. = 0.714
Pour 25°C --> D.O. = 0.711
Pour 30°C --> D.O. = 0.709
Pour 40°C --> D.O. = 0.710
Pour 60°C --> D.O. = 0.095
Pour 80°C --> D.O. = 0.025

Pourquoi la D.O. maximale est celle à 4°C ? car à mon avis la D.O. maximale doit être à 40°C car c’est la température optimale pour l’activité enzymatique de l’enzyme béta-gal

Merci d’avance

Sauf que c'est très différent de faire une réaction à 4°C et de pré-incuber l'enzyme AVANT la réaction....si ca peut te donner une piste...

[A voir en vidéo sur Futura]