Extraction proteines nucleaires

[invitec99d9c39]

Bonjour a tous,

J'ai deja fait des extraction de proteines Noyau/cytosol mais mon protocol (qui ne contient pas d'ultracentrifugation) n'est pas tres propre. Dans le sens ou il enrichit les fractions mais celles-ci contiennent des contaminations des autres compartiments.
Je sais aussi qu'il existe des kits, je ne sais pas lequel vaudrait le coup que je commande, si je me dirige vers cette direction.
Enfin, si vous avez un protocol, je suis limitee par l'ultracentrifiguation a laquelle je n'ai pas acces dans mon labo.
Merci beaucoup pour les reponses!
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[invite9eab997a]

Salut,
j'utilise le kit d'extaction NER de chez PIERCE. Les fractions sont propres mais pour certaines lignées, j'ai du faire la manip 2 fois pour avoir un resultats nickel.
L'extraction dure environ 1h30, centri comprises.
J'avais essayé auparavant un protocole "maison" et je n'ai jamais réussi à obtenir qqchose d'aussi propre qu'avec le kit.

Céline

[invitec99d9c39]

Merci, je vais donc me resoudre a utiliser un kit, ce sera un meilleur choix temps/prix/efficacite!

[invitec99d9c39]

J'ai fait une premiere manip avec le kit NER, je n'ai pas encore le resultat, le western est en cours mais peut-tu me dire quels controles de charge noyau/cyto tu utilise? Surtout que j'ai des condition avec de la Leptomycine B qui bloque le transport nucleaire et bloque notamment l'actine....
Merci

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite226a9f74]

bonjour,
je purifie des proteines, produitent en systeme procaryote, à l'aide du systeme de bille magnétique en nickel de chez promega. mes proteines sont des prot taggé 6xhis. jaimerai savoir si il est possible de recycler ces bille pour une nouvelle utilisation. merci