Salut à tous !
j'ai essayé de résumer mon pb dans le titre. En fait j'ai mis mes cellules adhérentes dans du tampon de lyse pour immunoprécipitation, mais j'ai oublié la centrifugation et je n'ai donc pas récupérer les membranes et noyaux. Donc là j'ai ajouté mon sample buffer mais biensur j'ai ma fraction qui est trop visqueuse pour être déposée en blot ! que dois je faire pour pouvoir déposer???
Tu peux toujours centrifuger maintenant pour pouvoir récupérer tes protéines dans le lysat (surnageant) et déposer ensuite (il faudrait peut-être voir s'il faut rajouter du sample buffer ou non).
Autre méthode, recommencer même si c'est pas amusant!
Coucou, tu peux peut-être soniquer tes échantillons pour diminuer la viscosité...
Bonjour!
Il y a 2 choses.
D'une part la centrifugation n'est pas nescessaire pour récupérer les membranes : elle va simplement "descendre" les débris cellulaire et les noyaux effectivement. Mais les protéines membranaires seront présentes dans le surnageant.
D'autre part, la viscosité peut-être éliminée en chauffant : ce qui rend l'extrait visqueux c'est le DNA essentiellement. Après le problème peut aussi venir de la quantité de cellules que tu as lysé.
Pour ma part je travaille la majorité du temps sur des cellules que je lyse directement dans du Laemli et je charge sans centrifuger.
V.
