Répondre à la discussion
Affichage des résultats 1 à 4 sur 4

Problème : oublié centri sur cellules dans tampon de lyse => WB????



  1. #1
    cheyenh

    Problème : oublié centri sur cellules dans tampon de lyse => WB????

    Salut à tous !
    j'ai essayé de résumer mon pb dans le titre. En fait j'ai mis mes cellules adhérentes dans du tampon de lyse pour immunoprécipitation, mais j'ai oublié la centrifugation et je n'ai donc pas récupérer les membranes et noyaux. Donc là j'ai ajouté mon sample buffer mais biensur j'ai ma fraction qui est trop visqueuse pour être déposée en blot ! que dois je faire pour pouvoir déposer???

    -----


  2. #2
    PhD Douby

    Re : Problème : oublié centri sur cellules dans tampon de lyse => WB????

    Tu peux toujours centrifuger maintenant pour pouvoir récupérer tes protéines dans le lysat (surnageant) et déposer ensuite (il faudrait peut-être voir s'il faut rajouter du sample buffer ou non).
    Autre méthode, recommencer même si c'est pas amusant!
    Merci pour votre aide!

  3. #3
    Delphinette

    Re : Problème : oublié centri sur cellules dans tampon de lyse => WB????

    Coucou, tu peux peut-être soniquer tes échantillons pour diminuer la viscosité...

  4. #4
    Vinc

    Re : Problème : oublié centri sur cellules dans tampon de lyse => WB????

    Bonjour!

    Il y a 2 choses.
    D'une part la centrifugation n'est pas nescessaire pour récupérer les membranes : elle va simplement "descendre" les débris cellulaire et les noyaux effectivement. Mais les protéines membranaires seront présentes dans le surnageant.
    D'autre part, la viscosité peut-être éliminée en chauffant : ce qui rend l'extrait visqueux c'est le DNA essentiellement. Après le problème peut aussi venir de la quantité de cellules que tu as lysé.


    Pour ma part je travaille la majorité du temps sur des cellules que je lyse directement dans du Laemli et je charge sans centrifuger.


    V.

Discussions similaires

  1. [Biochimie] lyse de cellules de champignons filamenteux
    Par mzellea dans le forum Biologie
    Réponses: 0
    Dernier message: 11/03/2008, 14h33
  2. Tampon pH dans la dissolution du BSi
    Par Dekriss dans le forum Chimie
    Réponses: 3
    Dernier message: 05/10/2005, 11h22
  3. Cellules de convection dans l'asténosphère
    Par isa déry dans le forum Géologie et Catastrophes naturelles
    Réponses: 4
    Dernier message: 17/06/2005, 23h30