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Coloration HE



  1. #1
    tataly

    Coloration HE


    ------

    Bonjour,

    Lors de mes coloration en HE l'éosine fini toujours pas disparaitre (même après le montage).
    J'utilise de l'éosine aqueuse avec un milieu de montage aqueux.
    Avez vous un protocole à me conseiller?

    Merci

    -----

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  3. #2
    IngDr

    Re : Coloration HE

    HE sont miscibles dans l'eau, donc ca ne m'étonne pas que tu perdes en milieu acqueux. Moi j'utilise un milieu de montage de type résine, durcicssant ou non aux UV, apres deshydratation dans l'alcool.
    Rincage minimum apres l'hematox (10-15min), rapidement dans l'eosine (30s), rincage rapide a l'eau, puis EtOH 70% ==> 100%, xylène et montage.

    A savoir que pour une coloration à l'Hematoxiline, il y a deux type de coloration :
    soit tu colores progressivement, en laissant longtemps dans une solution peu concentré (et dans ce cas faut rincer rapidement)
    soit tu "sur"colores dans une solution tres concentrée, et il faut faire de nombreux lavage pour n'avoir que la coloration du noyau.

  4. #3
    djabioch

    Re : Coloration HE

    Citation Envoyé par tataly Voir le message
    Bonjour,

    Lors de mes coloration en HE l'éosine fini toujours pas disparaitre (même après le montage).
    J'utilise de l'éosine aqueuse avec un milieu de montage aqueux.
    Avez vous un protocole à me conseiller?

    Merci
    bonjour
    peut etre la durée de votre bain d'eosine est longue, moi je fait 30 sec sa marcher bien et j'utilise le toluene comme solvent pour le montage

    bon courage..

  5. #4
    tataly

    Re : Coloration HE

    Bonjour

    après discussion avec certaines personnes il est possible d'utilisé des solutions aqueuses et un milieu de montage aqueux. Elles perdent aussi un peu de coloration mais pas entièrement.

    je vous détaille mon protocole si jamais vous voyez un problème :
    décongélation des lames (tissu coupé au cryostat) à RT
    réhydratation en PBS 15 min
    hemalun 30s
    riçage eau 5 min
    eosine 20s
    rinçage rapide
    ethanol 100%
    xylène

    j'ai essayé de faire avec et sans xylène ; le résultat reste le même.
    de faire des bains d'alcool croissant en % (70-80-100% et 95-100% une autre fois) : même résultat disparation de l'éosine.

    j'ai changé de milieu de montage aqueux le problème est toujours le même.
    j'ai commandé un milieu de montage résineux. j'attends de le recevoir.

    Merci pour vos conseils.

  6. A voir en vidéo sur Futura
  7. #5
    IngDr

    Re : Coloration HE

    Je n'ai jamais essayé ce protocole, mais quelques remarques me viennent :
    en fait, ca ne sert à rien de deshydrater, si c'est pour mettre un milieu de montage acqueux, car les colorants HE étant solubles dans l'eau, vont se diluer dans le milieu de montage, et ne plus marquer spécifiquement.

    l'interet du xylène est d'éliminer l'EtOH, ce qui permet d'utiliser des milieux de montage de type résine qui ne passerait pas bien en EtOH

    j'avais mal lu ton premier post, une disparition de l'eosine est etrange, car en général, elle colore énormément, et dans mes manips, bien souvent c'est hématoxyline qui se décolore plus dans les rincages que l'éosine. As tu essayé de laisser plus longtemps dans l'éosine ? (le pH de ton milieu de montage est il bon ?)

    après une coupe congelée, la coloration HE risque de ne pas etre tres jolie, car la congélation créée des cristaux d'eau dans les cellules qui font exploser les cellules. D'où une hypothèse, mais dont je ne suis pas sur du tout, qui serait que la disruption de l'intégrité des membranes, et le fait que les cellules ne soient pas fixées, pourrait expliquer la disparition de la coloration.

  8. #6
    tataly

    Re : Coloration HE

    bonjour,

    oui j'ai essayé de laisser plus longtemps dans l'éosine : 1 minute et ça disparait aussi. QUand je fais juste la coloration Hemalun ça fonctionne bien.
    J'ai fait ma technique de coloration sans mettre de milieu de montage et donc de lamelle, l'éosine a tenu. J'ai changé de milieu de montage (mais toujours aqueux et ça a marché).

    J'utilise l'éosine aqueuse de chez sigma pure.

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