Internalisation / FRET

[invite9a726ed1]

Je souhaiterais visualiser mais aussi quantifier l'internalisation entre 2 cellules

Si je marque une cellule avec la GFP(introduction d'un plasmide portant la GFP) et l'autre avec la DsRED, est ce que je visualiserais un signal jaune si la cellule exprimant la GFP est internalisée par la cellule exprimant DsREd???
Je sais qu'il y a transfert de fluorescence possible si 2 proteines sont proches et donc interagissent mais si je souhaite démontrer qu'une cellule se retrouve à l'interieur d'une autre, comment visualiser ce phénomène et le quantifier?

merci pour votre aide
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[invite43dd87ea]

Je sais pas si tu aura un phénomène de Fret cela m'étonnerais mais avec de la colocalisation tu peux voir ce qu'il faut. Tu illumine en rouge, tu vois ta cellule 1 et ensuite illumine en vert et tu regardes la localisation, ensuite tu fais une superposition des images pour voir si elles sont au meme endroit. Je pense que tu pourra voir ce qu'il faut en faisant comme ca.

[Tiscarab]

je crois que tu cherches trop compliqué, ceci dit tu nous décris pas ton modèle cellulaire.
a priori, il suffit de marquer chacun des deux types cellulaires avec une sonde fluo, la gfp est ok mais c'est bien compliqué, une incubation avec une sonde lipophile fluo (type PKH67) ou avec une sonde AM suffit largement et ça prend 3O min
puis tu peux mesurer la phagocytose en microscopie (confocale encore mieux) en comptant les evenement par champs pour "etre statistiquement valable" ou par cytométrie en flux

[invite9a726ed1]

D'après toi (Tiscarab), il serait plus pratique d'insérer d'incuber mon premier lot de cellules avec la sonde PKH67 et mon deuxième lot de cellules avec la sonde PKH26 (rouge).
Les sondes étant lipophiles elles vont marquer tout l'intérieur de la cellule, et si il y a un phénomène d'internalisation alors je vais avoir une fluorescence jaune que je peux detecter par cytométrie de flux. Ai je bien compris??
Est ce que ce système est un système de quantification rapide (screen)?

Merci pour vos réponses et vos futurs réponses

[A voir en vidéo sur Futura]