Holà todo el mundo !
Voilà, je continue gaiement mon stage à Barcelone, mais maintenant j'ai un petit souci : je dois faire une construction plasmidique toute simple, donc digestion de l'insert et du vecteur par 2 enzymes de restriction, ligature, et puis transformation de bactéries E. coli.
Le seul souci c'est que personne dans mon labo ne semble avoir de protocole pour ces manipulations. J'ai bien une idée des manips à faire, mais pour ce qui est des quantités à digérer et à ligaturer, de si je dois faire un gel ou non à chaque étape et tout et tout (sachant que mon insert est en faible concentration, moins de 7 ug/uL ! Grâce à mon super kit de gel extraction dont je me citerai pas la marque !!)
Voilà, donc pour les infos : mon insert fait environ 700 pb, et je vais utiliser comme vecteur le plasmide pBluescript SK, et je sais quelles enzymes je vais utiliser. Si vous avez une idée de protocole, des quantités, des temps d'incubation et tout je suis preneuse !!
Merci d'avance à tous !
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