Technique d'immuno-marquage

[invitebc2952d7]

bonjour a tous,
en lisant un article sur le protocole d'immuno-marquage, j'ai trouvé qu'ils utilisaient le NH4Cl après une fixation au PFA (paraformaldéhyde), et que le rôle du NH4Cl est de neutraliser l'action du PFA,
quelqu'un pourrait-il m'éclairer sur le rôle exact du NH4Cl,
Merci par avance pour tous ce que vous pourrez faire en ce sens
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[invite8f0c515e]

En solution, NH4Cl se dissocie en NH4+ et Cl-, et NH4+ est un acide faible.
Enfin ça tu dois déjà le savoir, mais je sais pas si c'est ce qui te posait problème.

[Zellus]

Bonjour et bienvenue !

Je ne suis pas sûr mais je crois que l'ammonium du NH₄Cl va neutraliser les molécules de PFA libres qui n'ont pas servi à la fixation de l'échantillon. A confirmer.

[invitebc2952d7]

avant tout, merci pour votre intervention,
si j'ai bien compris : le NH4+ étant un acide faible, il va neutraliser l'alcalinité du PFA?
merci bcp

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite160a5434]

Il faudrait avoir le détail de l'action du PFA dans le test, et ce au niveau moléculaire. Ceci nous permettrait de confirmer l'hypothèse que je vais poser.

En supposant que c'est la partie aldéhyde et l'oxygène qui réagit de manière covalente ou pas dans le test, le NH4+ peut faire une attaque éléctrophile transformant la fonction aldéhyde en fonction alcool, inactive.

Cependant, et la je m'enflamme peut etre un peu, mais il est possible que la réaction ne s'arrete pas la et que l'amine précédement former s'attaque au carbone portant la nouvelle fonction alcool, qui à la suite de cette attaque formera de l'eau qui sera liberer ....

[Zellus]

si j'ai bien compris : le NH4+ étant un acide faible, il va neutraliser l'alcalinité du PFA?

Non, il ne s'agit pas de neutralisation du pH ici mais de la molécule de formaldéhyde, cad que l'ammonium va réagir avec le formaldéhyde pour donner sans doute de la méthylèneimine (figure 2) ou de la méthylamine (figure 3). Je ne sais pas vraiment où s'arrête la réaction en fait. Tout dépend du pH de ton milieu je pense.
Toujours est-il qu'à la base le principe reste le même : le formaldéhyde qui réagit normalement via son carbonyle avec l'amine d'une protéine ou d'un acide nucléique va cette fois réagir avec l'ammonium du NH₄Cl.
J'espère avoir été clair .