osmose hématies et leucocytes

[Vico31]

Bien le bonjour à toutes et à tous!

Dans le but de faire une extraction d'ADN à partir de sang, j'ai recherché des protocoles m'indiquant qu'il fallait faire éclater les hématies par choc osmotique...J'imagine donc qu'il faut ajouter une solution mois concentré (comme de l'eau distillée je pense) mais comment faire pour que seul les hématies éclatent et non pas les leucocytes??

J'entends par là est-ce que la membranes des leucocytes ont une résistance supérieure à celle des hématies et qu'il faudrait ajouter une quantité bien précise de solution moins concentrée?

Ou alors y a-t-il autre chose qui m'échappe?

Merci d'avance

Vico
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[invite9eab997a]

Bonjour,

effectivement les leuco sont plus résistants que les globules rouges. Pas au point de résister à de l'eau distillée cependant! Je ne me souviens plus de la recette de la solution de lyse que j'utilisais mais il y en a plusieurs ici: http://www.jle.com/fr/revues/bio_rec.../article.phtml

[Vico31]

ok ok merci beaucoup BioCell pour cette info mon prof de bio n'en savait rien^^
Super le site je le regarderais plus tard il risquerait que je te demande plus de détails...
Bonne soirée
Vico!

[guy52]

Bonjour,

les hématies humaines n'ayant pas de noyau je ne sais pas s'il y a beaucoup d'ADN à l'intérieur.

Pourquoi ne voulez-vous pas que les leucocytes se lysent?

Mais je ne sais pas à partir de quel type de sang vous avez prévu de travailler, peut-être que les hématies de certaines espèces possèdent encore un noyau.

cordialement,
Guy

[A voir en vidéo sur Futura]

[Vico31]

Je ne vais pas travailler avec du sang humain mais le résultat serait le même! Effectivement les hématies n'ont pas ne noyau donc peut d'ADN c'est pour cela que je veux les faire éclater. Je vais donc garder les leucocytes intacts pour les récupérer après centrifugation ce qui me permettras une fois les leucocytes récupérés de faire une extraction efficace.

Pensez-vous que cela soit une erreur et est-ce que cela amènera à un résultat?

Vico