optimisation ELISA

[invite6878756a]

bonjour a tous
j effectue pour la premiere fois des Elisa et le protocole doit etre optimisé car il y a beaucoup de bruit de fond alors je teste differentes conditions notamment differentes concentrations pour mon antigenes et mes anticoprs (c'est en cours pas encore de resultats) mais j'aimerais aussi essayer differentes conditions pour le blocage mais j'ai pas d'idées grandioses alors si quelqu'un veut bien m'aider
merci
conditions de blocage actuelles: 3lavages en PBs avec 20% de tween
ensuite 200µl de PBS 5%BSA 2%tween dans chaque puits et j incube la journée a 4°C
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[invited621e692]

Bonjour

pOUR L'ELISA que j'ai effectuer si je me souvien bien pour le blocking j'ai insister sur le lavage. les bruit fond peuvent étre dut a trois chose:

les Ac du sampling qui ne sont pas partit
Les proteine du svf qui peuvent interfere si elles portent l'antigene que tu recherche (pour cela lavage intense)
Et deslavage irregulier entre les sandwiching et le reste.
Maintenant pour optimiser... bahhh je ne voit pas la tout de suite... mais je v y reflechire.

[Zellus]

Salut !

Tes concentrations en tween sont énormes !! Normalement on l'utilise plutôt autour de 0,1%.
Oups j'avais pas vu que le post était aussi vieux. ^^