Extraction de l'ADN genomique des leucocytes

[invite153fc3fe]

Bonjour,
Apres la centrifugation du sang total receuilli sur EDTA,on receuille le plasma puis la couche des globules blancs(BC=Buffy Coat).
BC est dilue dans un volume egal du tampon T10E5(Tris-Cl et EDTA).
A quoi sert ce tampon??
Merci d'avance.
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[invite71f23525]

Le tris sert de tampon pour empêcher les variations de pH, ainsi que permettre l'isotonicité du tampon, pour ne pas que les globules blancs éclatent (d'habitude on utilise du NaCl pour des tampons physiologiques, mais apparemment ce tampon n'en contient pas si votre liste de composants est exhaustive). L'EDTA permet d'éviter une coagulation dans le cas où la couche de globules blancs est contaminé par une petite quantité de plasma, où sont présents les facteurs coagulatifs dépendant du calcium. L'EDTA en piégeant le calcium évite ainsi la coagulation.

Greg