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siRNA et pénétration / ARNsi



  1. #1
    CEBSARO

    siRNA et pénétration / ARNsi


    ------

    Bonjour,
    Je cherche un moyen d'introduire de façon stable un siRNA.
    J'ai testé un plasmide sans grand resultat c'est pour quoi je m'interesse à la penetratin. Est ce quelqu'un connait et a de l'expérience dans ce domaine ou alors connait un bon système d'introduction.
    merci
    CS

    -----

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  4. #2
    Igothigh

    Re : siRNA et penetratin

    Citation Envoyé par CEBSARO
    Bonjour,
    Je cherche un moyen d'introduire de façon stable un siRNA.
    J'ai testé un plasmide sans grand resultat c'est pour quoi je m'interesse à la penetratin. Est ce quelqu'un connait et a de l'expérience dans ce domaine ou alors connait un bon système d'introduction.
    merci
    CS
    Pour generer des lignee stables exprimant des siRNA, il existe des systemes retroviraux (pSiren si je me rappelle bien). Je ne comprends pas bien ce que vient faire la lpenetratin dans ce cas. La penetratin peut etre utile pour faire entrer des peptides (tout comme le peptide fusogene de la proteine Tat de HIV) voire des proteines recombinantes dans des cellules.
    Dernière modification par Igothigh ; 22/04/2005 à 21h42.

  5. #3
    CEBSARO

    Re : siRNA et penetratin

    Salut,
    Merci pour ta réponse si rapide
    En fait il a été décrit dans une publi (Troy, CM. et al., 2004, J. Neurosci. 24, 10040-10046) qu'un siRNA pouvait être couplé à penetratin ...c'est pourquoi je m'y interesse...donc je voulais savoir si quelqu'un avait un peu d'expérience dans ce domaine.
    A part les rétrovirus, qui imposent certaines contraintes, y aurait t - il un autre moyen?

  6. #4
    nayeki

    Re : siRNA et penetratin

    Hello,

    sur quel modèle travailles-tu ?
    Chacun pense ce qu'il veut... moi, je veux ce que je pense.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #5
    CEBSARO

    Re : siRNA et penetratin

    Salut,

    En fait, j'aimerais introduire ce siRNA qui fonctionne en transitoire de manière stable dans une lignée cellulaire. Les siRNA sont la grande tendance, et beaucoup de fournisseurs proposent leur plasmide qui est dit être le top of the top. J'en ai testé un en faisant varier les conditions et je ne retrouve pas les effets du transitoire...au vu du nombre de vecteur proposé, difficile de choisir...
    Et j'avoue que l'idée de la pénétratin était assez seduisante... mais bon
    Donc voila

  9. #6
    Igothigh

    Re : siRNA et penetratin

    Citation Envoyé par CEBSARO
    J'en ai testé un en faisant varier les conditions et je ne retrouve pas les effets du transitoire...au vu du nombre de vecteur proposé, difficile de choisir...
    Ca ne m'étonne pas trop et je ne vois pas en quoi la penetratin va resoudre ton probleme. Tu ne pourras jamais faire du stable avec de la penetratin. Comme tu le dis, tu peux coupler la penetratin avec des proteines ou des acides nucleiques, mais ce ne sera qu'un usage transitoire (et dans le cadre des siRNA, je reste sceptique quand a son interet...). Je ne sais pas comment tu as essaye de generer tes clones stables siRNA (si j'ai bien compris), mais de toute facon, il faut t'attendre a des difficultes qui seront lies au niveau d'expression (pas necessairement dependant de ton plasmide), mais du site d'insertion et de l'abondance/activite de la T3 polymerase dans ton type cellulaire. C'est aussi l'interet d'utiliser des retrovirus (ou autres virus si tes cellules ne se divisent pas) pour avoir une integration efficace (dans le cas des retro). Il n'en reste pas moins des problemes de niveaux d'expression variables qui necessitent un criblage de nombreux clones... sans compter les effets deletaires d'une telle expression qui ne sont pas forcement visibles en transitoire et qui élimine ta population dès que l'expression est stable. Pour contourner le problème, je crois qu'il existe des systèmes siRNA inductibles...

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  11. #7
    CEBSARO

    Re : siRNA et penetratin

    Citation Envoyé par Igothigh
    Pour contourner le problème, je crois qu'il existe des systèmes siRNA inductibles...
    Merci beaucoup et cette dernière idée peut être une nouvelle alternative...
    je vais me renseigner dans ce sens...à moins que déjà tu aies des noms ou référence...
    merci encore

  12. #8
    CEBSARO

    Re : siRNA et penetratin

    Encore moi...
    en fait les retrovirus seraient the solution ,mais je ne peux pas les utliser donc je suis obligé d'utiliser les manières "classiques" de transfection...
    en tout cas, comme je disais plus haut je vais chercher dans le sens des systèmes inductibles, cela me réduira peut être le choix...
    Enfin...merci encore

  13. #9
    Igothigh

    Re : siRNA et penetratin

    Citation Envoyé par CEBSARO
    à moins que déjà tu aies des noms ou référence...
    Essaie chez Clontech peut-etre, j'ai un vague souvenir d'une pub pour un tel systeme.
    Juste une question: pourquoi tu ne peux pas utiliser les retro?

  14. #10
    CEBSARO

    Re : siRNA et penetratin

    Salut,
    Pour les rétrovirus, on n'a pas l'autorisation dans le laboratoire où je suis...je crois qu'il faut être en P2...peut être que nous obtiendrons plus tard l'autorisation, cela serait bien

  15. #11
    nayeki

    Re : siRNA et penetratin

    Citation Envoyé par CEBSARO
    Salut,
    Pour les rétrovirus, on n'a pas l'autorisation dans le laboratoire où je suis...je crois qu'il faut être en P2...peut être que nous obtiendrons plus tard l'autorisation, cela serait bien

    Tu peux demander gentillement d'utiliser les facilités d'un labo voisin
    Chacun pense ce qu'il veut... moi, je veux ce que je pense.

  16. #12
    Igothigh

    Re : siRNA et penetratin

    Citation Envoyé par CEBSARO
    je crois qu'il faut être en P2...
    Normalement, toutes les pièces de culture sont aux normes P2. C'est plus un problème d'autorisation à manipuler des agents infectieux. L'absence d'autorisation devient vite limitant.

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  18. #13
    CEBSARO

    Re : siRNA et penetratin

    oui c'est cela...
    donc il est vrai que je dispose juste des moyens classiques...
    dommage...
    en tout cas merci à tous

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