Restriction bizarre

[invite88223cc0]

Re bonjour a tous , cette fois pour une question de microbio

voilou, en TP moi (florent ) et mon binome avaons purifié le meme plasmide obtenu par E coli.
Ensuite chacun de nous, avec le plasmide censé etre identique, l'avons soumit a 2 restrictions avec chaque fois une seule enzime et on a obtenu des résultats différents


voici le gel :


- pourquoi n'avons nous pas obtenu les meme bandes , lorsque le plasmide n'a pas été soumit a une restriction (piste 1 et 4) ? alors que les conditions été iden,tiques et le plasmide censé etre le meme...

A quoi peuvent donc etre dues chaque bande ?

Combiend e site de coupe a le plasmide pour chaque enzime ? je pense a 2 pour BGIII au vu des résultas dans les pistes 2? et auncun pour PVUII (vu que le plasmide migre a la meme hauteur que le plasmide mon pote sans digestion) Cela voudrtait dire que les bandes dans les pistes 2 et 3 correspondent au plasmide linéarisé mais pourquoi n'ont -ils pas migré à la meme hauteur ?

le prof voulant jouer avec nous nous a cacher les pistes 5 et 6 de mon pote et nous a demandé d'imaginer ou serait les bandes



Pourriez vous m'aider dans ces résultats bizarres ^^

Merci beaucoup
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[Zellus]

Salut !

Un peu petite ton image quand même. J'ai failli perdre un oeil.

Commençons par le début. Lorsque tu purifies un plasmide, tu peux être amené à observer trois formes différentes de cette même molécule, qui migrent à des vitesses différentes : une forme superenroulée, une forme circulaire relâchée (dans laquelle un des brin est coupé), et une forme linéaire, ou les deux brins sont coupés. La forme superenroulée migre le plus vite, suivie par la linéaire puis la circulaire (qui est le plus haut dans le gel donc ).
Le mieux bien sûr est de n'avoir que la forme superenroulée (non coupée donc) mais il y a généralement au moins de la forme circulaire (qui apparaît avant la linéaire vu qu'il n'y a qu'un coupure) en petite quantité ... Et plus l'ADN est malmené, plus il y aura les formes circulaire et linéaire ...

Je dirais donc que dans le puits 1 il y a les formes superenroulée (bande du bas) et circulaire relâchée (bande du haut) du plasmide. Avec BgIII il y a 2 coupures vu qu'on observe deux morceaux d'ADN, et avec PvuII il n'y a qu'une coupure et on obtient la forme linéaire du plasmide. Et tu vois qu'elle se situe bien entre les deux autres formes du plasmide.
On dirait donc que dans la piste 4 il n'y a que de la forme linéaire du plasmide ... Ton pote n'a pas été trop violent avec son ADN ? Ou alors peut-être que les échantillons ont été inversés et que le 4 est en fait le 6 ...

[invite771db9e2]

Juste une remarque, prends pas les gens pour ce qu'ils ne sont pas, ça sent l'énoncé d'exo à 100km a la ronde, le coup du prof qui cache les pistes ça n'arrive qu'en exo.

Autant être honnete, on t'aiderait de la meme manière.

[invite88223cc0]

zellus merci beaucoup pour la réponse. donc selon toi avec la piste 1 et 4, là où il n'y a pas eu de restriction, on observe les 3 formes différentes de plsamide : superenroulée, circulaire et linéaire.

De plus, selon toi, si évidement il ne s'est pas trompé de piste, dans la 5 et la 6 on devrait retrouver les memes bandes que dans la 2 et la 3.
ou bien vu que l'echantillon 4 ne semble exister qu'en forme linéaire, il est possible qu'avec PvuII, il n'y ai pas de coupure (si la coupure pour donner la forme linéaire a été faite au niveau du site de restriction que reconnait PvuII), ou alors 2 fragments et donc 2 bandes qui migrent plus loin que la simple forme linéaire du plasmide

et pour BGIII : minimum 2 bandes (si le site ou a été coupé le plasmide est un des sites de restriction de BGIII) ou 3 bandes. Mais ou ce placeraient elles sur le gel ?


merci

[A voir en vidéo sur Futura]