Protcole d'immunofluorescence

[invite762b5721]

Bonjour,

je travaille dans un labo et je n'ai jamais fait d'IF
Je prépare un protocole mais quelqu'un a t-il un protocole simple?

Mon but, tester à différentes dilutions un Ac secondaire (marqué fluorescent - marquage fait moi-même) pour vérifier la qualité du marquage. Je souhaite fixer des globules rouges sur une lame, puis incuber avec un Ac primaire (Mouse anti CD59) puis incuber avec mes différentes dilutions de l'Ac secondaire anti Mouse marqué puis lire sur microscope à fluorescence.
Mais voilà, je n'ai pas d'idée sur la technique de fixation des GR, ni de la concentration de l'Ac primaire,...
Merci d'avance pour votre aide
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[Flyingbike]

cela peut tellement varier qu'il n'y a pas de protocole de base. Le type de fixation peut influer sur le marquage, de même que les conditions de blocage (bsa, lait, etc...). La dilution de l'Ac primaire est à tester aussi.

[invite762b5721]

Merci
Je vais tester 2 ou 3 techniques de fixation, avec ou sans blocage par BSA et plusieurs concentrations en Ac primaire et on verra bien.