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Amorces ARN/ADN et Réplication/PCR



  1. #1
    Huh33

    Amorces ARN/ADN et Réplication/PCR

    Bonjour,
    Voila j'ai un petit doute quand à la composition des amorces dans ces processus.
    Pour la réplication il faut bien une amorce d'ARN synthetisée par une primase, puis l'ADN polymerase prend le relais? (elle est malgré cela ADN dependante vu que son brin matrice est de l'ADN ou bien on se refere à la matrice et alors elle est ARN dependante?)

    Pour la PCR dans mon cours y il y a écrit qu'on prend une amorce d'ADN, pourquoi ces differences d'amorce? Et pour la RT-PCR le brin matrice est de l'ARN mais quel est le type d'amorce?

    J'espere avoir été clair, merci d'avance si vous prenez la peine de répondre à mes questions

    -----


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  3. #2
    nowell

    Re : Amorces ARN/ADN et Réplication/PCR

    Bonjour

    En effet l'ADN pol prend le relais.

    Pour ce qui est de la PCR, une sonde qui se fixe en début et en fin de séquence à amplifier est necessaire pour obtenir la séquence spécifique d'intérêt.
    Ensuite, l'ajout de dNTP,tampon, Taq pol , haute température , et hopla, on a environ 10^20 à 10^30 amplifications, selon le rendement et la qualité recherchée.

  4. #3
    Kucing

    Re : Amorces ARN/ADN et Réplication/PCR

    Pour la réplication il faut bien une amorce d'ARN synthetisée par une primase, puis l'ADN polymerase prend le relais? (elle est malgré cela ADN dependante vu que son brin matrice est de l'ADN ou bien on se refere à la matrice et alors elle est ARN dependante?)
    Elle est ADN-dépendante, on se réfère à la matrice.
    Pour la PCR dans mon cours y il y a écrit qu'on prend une amorce d'ADN, pourquoi ces differences d'amorce?
    N'importe quelle extrémité 3'OH (ADN ou ARN) peut servir d'amorce pour les DNA polymérases. On utilise des amorces ADN en PCR parce que l'ADN est plus stable et plus facile à synthétiser que l'ARN .
    Et pour la RT-PCR le brin matrice est de l'ARN mais quel est le type d'amorce?
    L'amorce pour la RT (dans une réaction in vitro) est également une amorce ADN.


    Citation Envoyé par nowell Voir le message
    Bonjour

    En effet l'ADN pol prend le relais.

    Pour ce qui est de la PCR, une sonde qui se fixe en début et en fin de séquence à amplifier est necessaire pour obtenir la séquence spécifique d'intérêt.
    Ensuite, l'ajout de dNTP,tampon, Taq pol , haute température , et hopla, on a environ 10^20 à 10^30 amplifications, selon le rendement et la qualité recherchée.
    C'est plutôt 2^20 à 2^30, non ?

  5. #4
    Huh33

    Re : Amorces ARN/ADN et Réplication/PCR

    Merci énormement pour vos réponses limpides!

  6. #5
    nowell

    Re : Amorces ARN/ADN et Réplication/PCR

    j'avais la puissance 10 en tete,

    oui biensur, merci Kucing, c'est 2X10^20 que j'entendais...Mais sans les caractères spéciaux, plein de trucs deviennent très vite chiant à noter... Comme les exposants, les numéro atomiques, les réactions chimiques.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    kamor

    Re : Amorces ARN/ADN et Réplication/PCR

    Euh non non, Kucing a raison en écrivant 2^20.
    Ce sont des cycles de doublement de quantité. Après 1 cycle on a 2 fois plus d'ADN (2^1), au bout de 2 cycles, 4 fois plus (2^2), etc...

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