Salut,
encore une fois, je rame à l'avant veille de mes partiels...
au sujet de l'hybridation inverse, si j'ai bien compris, on amplifie l'ADN à l'aide de plusieurs couples d'amorces, dont seulement une (amorce dans le couple) est biotinylée.
enfin, c ce que dit mon cours...
donc si on considère que mettre en gras=biotinyler, pour une séquence double brin on aurait quelque chose comme ça, non ? (N= A ou C ou T ou G...mais de façon complémentaire pour que ça marche^^):
5NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN3(séque nce A avc l'anomalie recherchée)
on met NN comme amorce à l'extrémité 3': synthèse <=
on met NN comme amorce en 3' :synthèse =>
3NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN5(séque nce complémentaire mais on s'en fout de celle là)
comme ça, aps l'amplification on obtiendra uniquement des séquences A biotinylées (+ des séquences B non biotinylées), que l'on pourra mettre en évidence par hybridation avec des sondes complémentaires fixées sur une membrane grace à phosphatase alcaline+ streptavidine (on aura un précipité brun)
=> je pourrais avoir confirmation (et surtout explication si c pas ça)?
pour aller à l'essentiel (parce que suis pas du tout claire je sens...) : est-ce bien l'amorce complémentaire de la séquence d'intéret, seulement, qui doit etre biotinylée ?
(mer.., je pensais avr compris mais je m'aperçois que ma tentative d'explication est aussi clair que de la boue, surtout que c pas évident de faire un "schéma"...)
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