Synthèse de protéines in vitro

[inviteb4e69e1e]

Bonsoir à tous...

Petite question de Biochimie:

En relisant mon cours aujourd'hui, je suis tombé sur la synthèse in vitro de protéines. On nous y explique que le mécanisme est assez simple: par lyse de certaines cellules, on y récupère toute la machinerie nécessaire à la fabrication des protéines (ribosomes, tRNAs, tRNA synthétase, tous les facteurs,etc...) et que, à partir de là, on peut ajouter notre séquence d'ARNm afin de provoquer la synthèse de notre protéine. Un petit détail me chiffonne pourtant: dans notre lysat, il y a également tous les ARNm de la cellules lysée, et toutes ses protéines vont aussi être traduites.

Ce n'est pas un problème?

Si oui, comment peut-on retirer l'ARNm de notre lysat?
-RNase?
-séparation en colonne? (du style RNeasy)

Y a-t-il d'autres méthodes?


Merci beaucoup, et passez une bonne soirée

Astro
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[invitec9f0f895]

Salut

En general les cellules utilisées sont des reticulocytes de lapin (avantage ils n'ont plus de noyaux), et n'ont pour seule fonction de fabriquer de l'hémoglobine. Ce sont donc des sacs de ribosomes, tRNA etc... pour les procaryotes ont utilise gnérale des extraits de coli.

Dans tous les cas, ces extraits sont traités a la microccocal RNASe, ce qui permet de dégrader les ARNm endogenes. C'est une RNAse qui ne clive les ARN qu'en presence de Ca2+. Il suffit donc de mettre ensuite du EGTA (qui va chélater spécifiquement les ions Ca2+ pour l'inactiver totalement avant ajout des ARNm a traduire.

YOyo

[inviteb4e69e1e]

Merci pour ta réponse,

C'est vrai que j'aurais pas pensé aux érythrocytes...

merci bien et à la prochaine