Plasmide génie génétique

[invite94397744]

bonjour monsieur
pouvez-vous m'explique pour quoi un plasmide artificiel contient des gènes des résistance et un gène de lac z (le rôle de B_galactosidase) et les polylinkers merci
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[invite94397744]

pour facilite la qst : g pas compris esk l'ADN étranger peut se fixe dans l'un des 2 site des gènes de résistance
et comment sélectionner les plasmides récombinants

[invitee863e61a]

bonjour
pouvez-vous m'explique pour quoi un plasmide artificiel contient des gènes des résistance et un gène de lac z (le rôle de B_galactosidase) et les polylinkers
pour facilite la qst : g pas compris esk l'ADN étranger peut se fixe dans l'un des 2 site des gènes de résistance
et comment sélectionner les plasmides récombinants
merci

Un plasmide artificiel (vecteur) porte un ou plusieurs gènes de résistances pour sélectionner des cellules qui dans lequel ce plasmide est introduit. Le gène lacZ permet soit d'identifier facilement les cellules portant un vecteur avec un insert de celles dont le vecteur est vide (criblage bleu/blanc comme pour le vecteur pUC18). Le polylinker est une zone riche en sites uniques de restriction, ce qui y facilite l'introduction d'un fragment ADN par ligation.

[invite71f23525]

Bonjour,

Un titre explicite est exigé lorsqu'on ouvre une discussion. Si cela se renouvelle, la discussion concernée sera fermée le temps que tu me proposes un titre convenable par message privé.

D'autre part, évites le langage sms qui est interdit sur le forum.

LXR pour la modération

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite71f23525]

Les gènes de résistance permettent de sélectionner les bactéries qui ont intégré le plasmide, sur milieu sélectif (c'est à dire milieu nutritif + antibiotique le plus souvent) :

- Bactérie sans plasmide : meurent
- Bactéries avec plasmide : survivent

Le polylinker est une région contenant de nombreux sites de restriction qui vont permettre l'intégration de l'insert dans le plasmide.

Le gène LacZ est souvent présent dans le plasmide pour sélectionner les plasmides contenant un insert. Dans ces cas là, le polylinker est présent dans le gène LacZ. L'intégration d'un insert au niveau du polylinker a donc pour effet d'invalider la beta-galactosidase. Dans le milieu nutritif on ajoute du X-Gal qui est un substrat de la beta-Galactosidase et qui devient bleu lorsqu'elle le transforme.

Résultat : - Bactérie sans insert (donc avec beta-Galactosidase) : bleues.
- Bactéries avec insert (sans beta-galactosidase) : blanches.

Si on combine antibiotique et X-Gal dans le milieu nutritif, les bactéries qui auront poussé et qui seront blanches auront intégré un plasmide contenant un insert. Cela permet d'accélérer le criblage des bactéries qui nous intéressent.

[invite71f23525]

Lamine-bio, j'ajoute que les doublons sont interdits sur le forum. Cela occasionne une désorganisation du forum et c'est irrespectueux vis à vis des autres membres.

LXR pour la modération