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solubilité protéine, un beau SDS-PAGE



  1. #1
    Zdravo

    Question solubilité protéine, un beau SDS-PAGE


    ------

    Bonjour à tous
    difficile de trouver un bon titre.. Le plus simple étant de vous expliquer ce que je souhaite faire

    Contexte : Test de production de protéines recombinantes (GST et HIS)
    matériel : 2 clones pour chaque construction + les 2 vecteurs vides (donc un total de 6 conditions).

    Comme c'est un premier test, je me suis placé dans des conditions "classique" de mon labo concernant l'induction. J'ai attendu d'être dans une DO600 de 0.6-0.8 pour induire à l'IPTG (4h). J'ai récolté les surnageants et culots juste avec l'induction à l'IPTG, et après 4h.

    Problème : Faire un bon gel SDS-PAGE
    Non pas dans sa réalisation mais dans les quantités d'échantillon à mettre... D'après mes souvenirs d'anciens TP je pouvais faire en fonction d'un rapport DO600 avant/après pour que les dépôts soient comparables, et à mettre en relation avec le vecteur vide.

    je coince à ce niveau là... Je ne vois pas trop comment faire. Si quelqu'un a des suggestions

    merci ^^

    -----

  2. #2
    LXR

    Re : solubilité protéine, un beau SDS-PAGE

    Tout simplement tu lyses tes bactéries au sonicateur, tu doses les protéines du lysat et ainsi tu peux déposer à quantité égale en protéines.

  3. #3
    Zdravo

    Re : solubilité protéine, un beau SDS-PAGE

    merci
    mais je voulais éviter de passer par un dosage ^^

    Du coup j'ai retrouvé ce que j'avais fait par le passé. Je l'indique ici si ça peut servir...

    Je compare mon "T0" et mon "T+4" à DO 600.
    Si T0 = 0,6 à DO600 et que je souhaite en déposer 10ul
    Alors je devrais mettre 10/(DO600 T4/DO600 T0).

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