Western blot
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Western blot



  1. #1
    hoshi

    Western blot


    ------

    Bonsoir!

    Demain, j'ai une manip sur le western blot, et ce que je comprends pas la dedans, c'est pourquoi il y a plusieurs puits dans l'électrophorèse??
    Dans le premier, on met l'échantillon standard ca je comprends, mais après pourquoi on n'utilise pas qu'un seul autre puit pour y mettre la solution de protéines qu'on veut séparer?

    Merci! =)

    -----

  2. #2
    Moustik34

    Re : Western blot

    Bonsoir,
    ça dépend de combien d'échantillons tu as à tester. Si tu n'as qu'un seul extrait protéique à tester, tu n'utiliseras qu'un seul puits, si tu as plusieurs conditions à tester, tu utiliseras autant de puits que de conditions.

  3. #3
    chamouulox

    Re : Western blot

    Bonsoir Hoshi, il serait préférable d'avoir ton protocole sous les yeux pour te répondre.

    Il est possible que tu utilises des anticorps différents pour tes différents puits par exemple.

    Cham

  4. #4
    hoshi

    Re : Western blot

    Merci pour vos réponses!

    Le titre de la manip c'est: détection du récepteur humain au glucagon (hGLR) par un sérum polyclonal anti-hGLR en western blot.

    Les protéines ont déjà été dosées et ont été diluées à une concentration de 1ug/uL
    Nous on doit d'abord prélever 80 uL et ajouter à ca le SDS puis agitation/centrifugation/chauffage/centrifugation.
    Après quoi on charge le gel et la je comprends pas:

    Pistes Vol/piste Quantité/piste
    1. Marqueur PM 10uL
    2. HEK-hGL (ug/piste) 5uL 2.5
    3. HEK-hGL (ug/piste) 10uL 5
    4. HEK-hGL (ug/piste) 20 uL 10
    5. HEK-hGL (ug/piste) 40uL 20

    A lire: dans la piste 2 par ex, vol/piste: 5uL et quantité/piste: 2,5 ug

    Je comprends pas ce qu'on fait la, pourquoi plusieurs pistes avec le même truc dedans mais à des concentrations différentes? ca sert à quoi?
    Dernière modification par hoshi ; 12/11/2012 à 01h06.

  5. A voir en vidéo sur Futura
  6. #5
    chamouulox

    Re : Western blot

    J'avoue être surpris, a part pour calibrer le signal je vois pas trop à quoi ca peut servir....

  7. #6
    hoshi

    Re : Western blot

    En fait c'est juste pour comparer l'épaisseur des bandelettes qu'on aura à la fin du western blot... =D
    Donc, y avait rien à comprendre en fait!

    Merci!!

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