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Mercaptoethanol et DTT demande d'informations



  1. #1
    Krikezz

    Mercaptoethanol et DTT demande d'informations


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    Salut j'ai plusieurs questions sur le Mercaptoethanol et le DTT :

    1)Quelle est la différence entre les deux ?

    2)Durant le western blot si on oublie d'en mettre dans le buffer de lyse et dans le sample buffer, quelle en est la conséquence pour la migration ?

    3)A quoi servent ces deux produits, j'ai pu lire qu'ils servaient soit à protéger contre les dégats d'oxydoreduction soit pour dénaturer les pont disulfure, est-ce vrai ? Si oui de quoi dépendent ces deux propriétés, ont elle lieu en même temps ou dépendent t-elles de la concentration en BMEM/DTT ? Parfois ils demandent d'en mettre dans certains buffer de réaction enzymatique, mais si ca dénature comment ca se fait qu'on veuille en mettre ?

    4)Pourquoi à chaque fois ils disent qu'il faut les ajouter juste avant l'utilisation (ADD JUST BEFORE USE) ? Si on les rajoute dans la solution stock et qu'on la conserve à 4°C et qu'on l'utilise une semaine après est-ce que c'est gênant ? Pourquoi ?

    Voilà merci je n'arrive à trouver aucune réponse à ces questions sur internet !

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  2. #2
    biseibutsu

    Re : Mercaptoethanol et DTT demande d'informations

    Bonjour,

    1) La différence entre beta-mercapto et DTT? A part l'odeur? Le mode d'action est le même, vu qu'ils ont tout les deux au moins une fonction thiol.
    2) En fait, certaine migration se font sans beta ou DTT. Tout dépends de ce que l'on cherche à voir. Une partie de la réponse est dans la 3)
    3) Comme tu l'as dits, il y a deux actions : protection contre l'oxydation et réduction des ponts dissulfure. Les deux composés servent surtout à protéger l'oxydation des cystéines, mais également, en biochimie, à réduire les ponts dissulfure. Et voilà la grande différence entre beta et DTT. Il faut deux molécules de beta pour réduire un pont dissulfure, contre une seule pour le DTT. Ces réactions consomment le produit, et pour une action efficace, il vaut mieux en avoir en excès. Dernier point, dans les réactions enzymatiques, c'est surtout le rôle protecteur de l'oxydation qui est recherché, les enzymes n'ayant pas forcément des ponts dissulfures (ou pas en relation avec l'activité enzymatique elle même).
    Je rebascule sur la 2) : la réduction des ponts dissulfure va détruire des complexes protéiques (structure quaternaire), libérer des sous-unités (structure tertiaire) et généralement déplié la protéine (structure secondaire). Les protéines vont donc "grandir", et ainsi, la protéine aura un poids moléculaire plus proche de la théorie (calculer par ordinateur suivant sa composition en AA). Prenons le cas de l'insuline, par exemple : deux chaines d'AA reliés par des ponts dissulfure, plus des ponts dissulfure intra-chaine. Sans beta, on observe une petite protéine. avec beta, les deux chaines sont séparées, donc deux très petites protéines (ou peptides suivant les avis )

    4) pour celle là, je ne sais pas trop. En mode logique, il est probable que ces composés perdent de leur activité lorsqu"ils ne sont pas très concentré. Mais je n'en suis pas sur.
    Dernière modification par biseibutsu ; 24/05/2013 à 02h22.
    微生物

  3. #3
    TanguyE

    Re : Mercaptoethanol et DTT demande d'informations

    Pour le DTT, il est instable en solution aqueuse car sensible à l'oxydation par l'oxygène de l'air. C'est pourquoi, une fois dilué, il faut le conserver congelé et l'ajouter au dernier moment au tampon.

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