Plasmide dégradé

[invite6d22a421]

Bonsoir
j'ai réalisé une miniprep afin d'extraire le plasmide qui va me servir pour le clonage
après visualisation sur gel , j'ai obtenu 2 bandes
une correspond à la forme circulaire et l'autre à la forme linéaire
Le lendemain ,j'ai testé mon plasmide avant d'effectuer la digestion enzymatique ,j'ai constaté qu'il est dégradé !!
j'ai refait la miniprep plusieurs fois avec des nouvelles solutions , et j'ai obtenu toujours le même résultat !!
un bon résultat le jour de l'extraction mais par le suite le plasmide se dégrade !!
c'est dû à quoi ? et comment je peux éviter ce problème !
-----

[invite4ff72fd5]

Apres mini prep tu ne devrais pas voir beaucoup de plasmide lineaire mais voir surtout une forme supercoiled.

C'est assez difficile a dire, mais je crois pas en la magie, donc tu as surement une contamination nuclease quelque part. Regarde en changeant TOUTES tes solutions (chose que tu as faite apparement) ainsi que tes pipettes/cones?

[invite6d22a421]

oui j'ai déjà changé ttes mes solutions
mes cônes et mes pipettes sont stériles !!
y'a t'il pas une cause autre que la contamination par une nucléase ?

[invite4ff72fd5]

Envoie nous des gels qu'on puisse voir ce que tu obtiens.

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteb3a6feac]

Bonsoir

tampon de resolubilisation de la miniprep peut-etre en cause....
Vous utilisez quoi ? RB, TE, EUP ... ?

Cordialement

[invite6d22a421]

j'utilise le TE
c'était à cause du tampon et j'ai résolu le problème