[Méthode d'étude] Immunochimie : Etape de contrôle.

[invite38d9e885]

Salut !

Aujourd'hui j'ai vu le principe de l'immunochimie et tout allait bien (comprendre un cours de bio C c'est agréable ) jusqu'au moment de l'explication des étapes de contrôle de l'expérience tel que voir la photo post 2 :
1)Dans ce cas je comprends que l'interaction spécifique c'est ni plus ni moins que le but de l'expérience à l'étape 1.

2) Même remarque que le 1) mais à l'étape 2.
Par curiosité je me demande si l'AC primaire devient Ag (de l'AC secondaire) et donc possède une épitope, qu'en pensez vous ?

3) Là cela se complique. Mais en gros y'a un souci !
Quel est la définition de : AC non Immun ?

4) Là aussi y'a un souci !

Que pensez vous des phases 3 et 4 ? J'ai marqué quelle correspondaient au contrôle primaire et secondaire.

Merci d'avance et bonne journée .
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[invite38d9e885]

Voilà la photo .

[invite38d9e885]

Voilà c'est mieux, excusez moi pour la premier photo.

[piwi]

En gros, chaque anticorps peut se fixer sur la cible attendue (c'est que l'on appelle un marquage spécifique) et/ou sur des cibles inattendues (c'est que l'on appelle un marquage aspécifique). En général, l'affinité de l'anticorps est largement supérieure pour sa cible (il est fait pour reconnaitre cette cible) que pour ses sites de fixation aspécifique. On peut donc diminuer le bruit du signal en lavant de manière plus ou moins stringente.

Si on reprend, votre photo, vous avez un anticorps primaire qui va se fixer sur l'antigène (marquage spécifique). Il peut cependant se fixer sur une autre cible (marquage aspécifique).

L'anticorps secondaire suit les mêmes règles. Il est conçu pour se fixer sur l'anticorps primaire mais peut se fixer aussi ailleurs. Un bon moyen de vérifier cela est d'incuber une préparation avec uniquement l'anticorps secondaire. On observe alors uniquement le marquage aspécifique.

L'anticorps non immun est un contrôle qui est parfois fait et qui permet de détecter le bruit de fond généré par le type d'anticorps primaire utilisé.

Cordialement,
piwi

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite38d9e885]

Salut piwi.

Votre distinction marque spécifique et aspécifique rend parfaitement clair les deux première étape merci .
Au passage je me demande par curiosité si l'AC primaire devient Ag (de l'AC secondaire) et donc possède une épitope ? Qu'en pensez vous ?

Vous dites : "On peut donc diminuer le bruit du signal en lavant de manière plus ou moins stringente". Cela m'a emmené à faire des recherche :
La stringence c'est la variations des conditions de l'environnement (Température, concentration sel, ect.)
La bruit du signal et le bruit de fond par contre je n'ai pas trouvé, quelle sont ces notions ?
En définissant le bruit de fond je pense ainsi mieux comprendre la notion d'anticorps non immun.


Pour la situation trois, votre remarque me laisse penser que : Bon cas : AC 2 marquage aspécifique avec Ag et Mauvais cas : AC 2 marquage spécifique Ag.
Ai-je saisi votre propos ?

Merci et bonne soirée !

[piwi]

Pour la notion d'epitope, il s'agit simplement d'acide aminés, proches dans l'espace, qui vont être reconnu par un anticorps, l'antigène, est la protéine qui porte l'épitope. Du coup, cela répond à votre question ^_^

Pour la bruit de fond, il s'agit du signal aspécifique observé, c'est une propriété du signal, c'est ce que j'ai appelé le bruit du signal. L'anticorps non immun est supposé se fixer nul part. Sa fixation est toujours considéré comme aspécifique. Ainsi, en utilisant le même isotype que l'anticorps primaire, on suppose que l'on va reproduire le bruit de fond généré par l'anticorps primaire (personnellement je trouve ce contrôle assez aléatoire et plutôt trompeur au final; je lui préfère l'utilisation d'un tissu n'exprimant pas l'antigène de l'anticorps primaire, encore faut il avoir un tel tissu).

Cordialement,
piwi