recherche d'un contact par mail avec un laborantin

[invitef4e45f9a]

En quoi consiste cette première étape de lyse de cellule puis directement de PCR ?
Si je comprends bien du prélève de la salive (?) d'une personne aux résultats de l'électrophorèse il se serait écoulé, en théorie 4heures minimum ?
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[invitee4e79868]

En fait, l'étape de purification de l'ADN n'est plus obligatoire, surtout que l'on travaille avec des quantités infimes d'ADN. Le problème de ne pas purifier, c'est que les protéines de la cellule peuvent venir perturber la réaction PCR. D'où l'étape de purification de l'ADN, afin d'enlever un maximum de protéines. Mais maintenant, la technique PCr travaille avec des quantité tellement faible de cellules qu'il n'y a plus de problèmes.
Concrètement, la lyse des cellules est réaliser par la chaleur, tout simplement (5min à 72°C généralement) avant de faire le cycle PCR (cycle passant de 95°C à 72°C plusieurs fois). Avec cette méthode et en diminuant au maximum le nombre de cycle (ce qui n'est pas forcément prudent), il est possible de ne mettre que 4h, oui. Cependant, plus la quantité d'ADN de départ est faible, plus il faudra de cycle d'amplification (et donc de temps).

[mh34]

Tolistento, en relisant toutes vos interventions, ( sur les autres fils que vous avez ouverts également) on a vraiment l'impression qu'elles ont un but bien précis et ne sont pas simplement de la curiosité. Lequel, si ce n'est pas trop vous demander? Parce que vous auriez sans doute une réponse plus rapide si vous nous disiez ce que vous cherchez à démontrer ou à prouver, plutôt...

[invitef4e45f9a]

Pour cette discussion je ne crois pas avoir parler de curiosité, effectivement j'ai un but précis en l’occurrence, mais il est clair que seul la théorie m'intéresse.

[invitef4e45f9a]

Ne vous inquiétez pas mh34 ,ce que vous semblez être mdrr, je sais ce que je fais.

[invite179e6258]

mais il est clair que seul la théorie m'intéresse.

où ça de la théorie?

[invitef4e45f9a]

Je veux simplement dire que ce que vous me dites ne me sera pas utile pour que je pratique moi.