mix pcr
bonjours à tous ,
après ma pcr , et pendant que je mesurais les DO , je me suis rendue compte que j'ai oublié de mettre mon mix pcr dans un seul de mes échantillons , l'amplification n'a pas eu lieu évidement , est ce que je peut toujours réutilisé ce produit , c'est le dernier qui me reste , sinon je vais devoir tout recommencé à 0
merci de me répondre c'est très urgent svp!!!
si c'est quantitatif je dirais non parce qu'il faudrait tout repasser en parallèle. SI c'est qualitatif, pourquoi ne pas essayer ?
non j'ai pas fais de pcr en temps réel , juste une rt pcr , je vas essayer alors
merci pour votre réponse
vous voulez dire une reverse ? si c'est ça votre échantillon doit être mort
oui c'est bien ça une reverse , mais pourquoi je perds mon ADN lorsqu'il s'agit de ce type de pcr spécialement ?
merci pour votre réponse
Si tu fais une RT-PCR, tu ne commences pas avec de l'ADN, mais de l'ARN. Plus sensible, plus fragile, plus délicat... Les cycles d'amplification "à vide" ont du le dégrader en (grande) partie.
bonjour ,
merci pour votre réponse
oui c'est vrai , j'ai essayé d'ajouter un mix à mon extrait de pcr et de relancer , il semble qu'une amplification a eu lieu cette fois ci , j'ai une concentration de 2600ng/µl et un rapport 260/280 de 1.6 , cependant j'ai un doute est ce que c'est mon adn qui a été amplifier ou bien c le produit de mes propres amorces !!!
je pense que l'idéal serai de refaire depuis l'extraction ??
Tu as probablement raison. Mais vu la concentration élevée, tu peux avant faire une migration du produit PCR sur gel (d'agarose), afin de confirmer la taille (seulement si la taille de ton fragment amplifié est bien supérieur à celle de tes amorces - 5/10 fois minimum). Cela pourrait t'éviter de faire une nouvelle extraction (ou pas)
merci bonne idée
