Bonjour et d'avance merci à tous les forumeurs qui pourront m'apporter des éclaircissements.

Je viens de voir en cours des techniques pour travailler sur la cellule, l'adn, les protéines, ... de manière non détaillée. J'ai cependant envie d'en savoir un peu plus, donc j'ai cherché sur google, en français comme en anglais ainsi que sur les bouquins que je possède, mais je n'arrive toujours pas à parfaitement comprendre certaines notions (ou du moins, je ne suis pas sûre de moi).

De ce que j'ai pu lire, il a ya des différences entre les lignées cellulaires immortalisées et les lignées transformées. Si j'ai bien compris et traduit, les cellules immortalisées sont des cellules capables de se diviser indéfiniment, mais subissant tout de même une inhibition de contact, donc lorsqu'elles sont cultivées, elles se multiplient mais ne sont pas invasives, cad croissance en une seule couche de cellules. Il faut donc les repiquer (faire un passage?) pour qu'elles recommencent à se diviser. De plus, si elles sont injectées à des rongeurs, les rongeurs ne développent pas de tumeurs.

A l'inverse, les cellules transformées ont perdu cette inhibition de contact, et sont donc capables de se diviser de façon "anarchique", en plusieurs couches. Elles seraient donc invasives. Si on les injecte à des rongeurs, ils développent des tumeurs. Certaines cellules transformées peuvent aussi développer d'autres caractéristiques, telles que la possibilité de croissance en absence de facteurs nutritifs, divisions non contrôlées par les signaux du cycle cellulaire (G1/S, G2/M,...), pas de réponse aux inhibiteurs de division, pas d'apotose, capacité à encourager l'angiogénèse.

Déjà, 1ere question, ai-je bien compris?

Petit souci de compréhension des techniques pour obtenir les 2 types de lignées. Dans le livre "Biologie Moléculaire de la cellule" (Alberts), il est indiqué que:
- l'apport du gène codant pour la sous-unité catalytique de la télomérase permet de modifier des fibroblastes humain pour obtenir une lignée de cellules immortelles. Mais que certaines cellules humaines ne deviennent pas toutes immortelles grâce à cette astuce, et qu'il faut introduire plus que le gène de la télomérase, à savoir inactiver les gènes de contrôle du cycle cellulaire, en introduisant des oncogènes dérivés de virus tumoraux.
- possibilité d'engender des lignées cellulaires à partir de cellules cancéreuses. Ces lignées croissent sans se fixer sur une surface, et peuvent donc bien plus proliférer. Il existe des techniques qui permettent d'induire ces propriétés dans les cellules normales en effectuant des transformations grâce à des virus ou des molécules chimiques capables de "créer" des tumeurs.

La 1ere technique, touchant juste à l'ajout des gènes de la télomérase et des oncogènes viraux = immortalisation.
La 2eme technique, utilisation d'inducteur de tumeurs = transformation.

C'est bien ça?

Si c'est bien ça, alors me vient en tête la question suivante: quelles méthodes pour faire des transformations? Et à l'inverse, des exemples pour immortaliser? par exemple, l'ajout du gène codant pour l'antigène T du SV40, est-ce une technique pour immortaliser ou pour transformer?
En terme de techniques, il n'y a pas finalement de différences vraiment majeures pour obtenir soit une lignée immortalisée soit une lignée transformée: c'est juste l'insertion d'un ou plusieurs gènes dans une cellule pour qu'elle acquiert une "nouvelle" fonction (insertion qui peut se faire de plusieurs manières). Et selon le(s) gène(s) inséré(s), on obtiendra donc soit des cellules capables de se diviser indéfiniment possèdant une inhibition de contact, soit des cellules type tumeurs à division anarchique?


Si on devait rapidement résumer les différents types de culture cellulaire, on a donc:
- culture de cellules normales, sénescentes, se divisant un nombre limité de fois avant leur mort, car à chaque division il y a perte de parties télomériques. Même si on fait un passage, pour obtenir une culture secondaire, ça ne changera rien à leur "date de péremption".
- culture de cellules tumorales, se divisant de façon anarchique, invasives.
- immortalisation de cellules normales pour induire des divisions illimitées dans le temps, mais limitées par rapport au milieu de culture (épuisement des substances nutritives) et la superficie possible pour la croissance (une couche et ça s'arrête).
- transformation de cellules normales en cellules invasives, à multiplication anarchique, et non limitées.

Pour l'insertion d'ADN, cela peut se faire en utilisant des polymères cationiques (exemple DEAE dextrane, PEI), des liposomes, des protoplastes, l'électroporation, la biolistique, la micro-injection. Existent-ils d'autres techniques souvent employées?

J'ai cru comprendre que la transfection ne fonctionnait pas à 100% cependant, et qu'en prime, cela pouvait induire l'apoptose. comment vérifier que tout a bien fonctionné? En insérant des gènes de sélection?

Bref, beaucoup de questions, plus par curiosité qu'autre chose.
Un grand merci pour toute correction, aide, explication, ... que vous pourrez me donner.