sequence d'adressage mitochondriale protéine TOM 20

[invitea688522d]

Bonjour,

je n'arrive pas à résoudre un exercice.. je ne comprend pas l'expérience du coup je ne peux pas répondre aux questions. Merci de votre aide.


Pour déterminer les domaines protéiques responsables de la localisation de la protéine TOM20 à la
mitochondrie, on a réalisé différentes formes de la protéine TOM20-GFP délétées d’un ou plusieurs domaines membranaires et refait la même expérience que précédemment pour voir la localisation de ces différentes formes de protéines TOM20-GF dans les mitochondries ou pas.


c) Décrivez et interprétez les résultats présentés dans la figure 3B

d) D’après ces résultats, quelles régions sont-elles nécessaires pour adresser la protéine TOM20 à la mitochondrie?

e) Quelle expérience feriez-vous pour démontrer que ces régions sont suffisante pour adresser la protéine TOM20 à la mitochondrie, représentant alors une séquence d’adressage mitochondrial ?



Des mutations ponctuelles ont été réalisées dans le premier sous-domaine de la région 25-51 de la
construction TOMΔ25-51GFP, afin de remplacer un ou plusieurs des acides aminés basiques par des acides aminés neutres, comme détaillé dans la figure 4A. Chacune de ses constructions mutantes a été
introduite dans des cellules CoS-7 et la localisation de la GFP a été examinée en comparaison de la fluorescence émise par le MitoTracker dans lesquelles les cellules sont incubées. Les résultats sont présentés dans la figure 4.

g) décrivez et interprétez les résultats.


Merci d'avance de me donner des pistes..
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[invitec9f0f895]

Salut

Qu'est ce que tu ne comprends pas précisément? l'expérience? le résultat?

Yoyo

[invite7c195df2]

Salut

Qu'est ce que tu ne comprends pas précisément? l'expérience? le résultat?

Yoyo

j'ai le même exercice à faire et je n'ai rien compris... Si quelqu'un peux m'éclairer sur le sujet svp
Merci d'avance

[invitec9f0f895]

Salut

Meme question que précédemment ont peut t'aider, mais on ne le fera pas à ta place en t'apportant des réponses toutes faites.
A toi de nous dire ce que tu as fait, et nous on te guide.

YOyo

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite7c195df2]

Je n'arrive pas à comprendre les images des cellules colorées avec Mitotracker et GFP où sont les mitochondries??

Ce que j'ai compris moi c'est que Mitotracker colore la mitochondrie alors que GFP des protéines membranaire des mitochondries donc comment ça se fait que la coloration est au même endroit? 'Normalement il devrait y avoir la coloration rouge au centre (Mitotracker qui colore la mitochondrie) et le vert autour (GFP qui colore les protéines membranaires)...

Merci de m'éclairer!

[invitec9f0f895]

Salut

Tu as bien compris, sauf que la GFP te permet de suivre UNE protéine (toM20). Le mitotracker colore l'ensemble de la mitochondrie ca te donne l'endroit ou devrait etre tom20 si tout est normal.
A ce grossissement tu ne peux pas faire la différence entre la membrane et l'intérieur de la mitochondrie c'est beaucoup trop petit.

YOyo

[invite7c195df2]

Ah d'accord! Donc si je comprends bien comme dans l'image on voit que l'endroit où est localisée la mitochondrie (Mitotracker) est le même endroit où est localisé la protéine TOM20 (GFP) donc la protéine TOM20 est dans la mitochondrie. C'est bien ça?

[invitec9f0f895]

Oui c'est l'idée générale en effet. Après il va y avoir des subtilités car ce n'est pas toujours le vrai avec toutes les formes de tom20.

Yoyo

[invite7c195df2]

En fait, l'image dont je vous parle c'est celle-ci!
J'ai eu beaucoup de mal à comprendre les résultats de cette expérience..

[invite7c195df2]

Donc pour "décrivez et interpréter les résultats de cette expérience" c'est bien ce que je vous ai expliqué plus haut?

[invite7c195df2]

De plus, je n'arrive pas à comprendre ce qui ce passe dans les premiers dessins lorsque l'on enlève tous les domaines sur TOM20 (delta)25-69 -GFP
Merci d'avance pour vos réponses.

[invitec9f0f895]

Donc pour "décrivez et interpréter les résultats de cette expérience" c'est bien ce que je vous ai expliqué plus haut?

Oui tu vois une supperposition des deux marquages, ce qui signifie que TOM20 est dans la mito.

De plus, je n'arrive pas à comprendre ce qui ce passe dans les premiers dessins lorsque l'on enlève tous les domaines sur TOM20 (delta)25-69 -GFP
Merci d'avance pour vos réponses.

Est-ce que les mitochondries continuent d'etre marquées avec tom20? ou se trouvent les protéine tom20 dans le mutant?

YOyo

[invite301082c0]

Bonjour.
J'ai eu le même exercice et j'ai du mal à comprendre la différence entre la localisation de la proteines dépourvue de la totalité de son domaine juxtamenbranaire /\25-69 (1) et celle de la protéine avec délétion /\25-51 (1)

Ce que je pensais :

(1) sans le domaine juxtamembranaire la proteines tom20 n'est pas àdressée vers la mitochondrie et s'agglutine en amas aléatoirement dans la cellule ou est adressée vers la mitochondrie mais ne s'ancre pas dans la membrane ?

(2) je ne comprend pas où est localisée la proteines tom20. Elle est a l'intérieur (au cœur) de la mitochondrie ? Et si c'est le cas comment cela est-il possible ?

Existe-t'il un lien, ou une interaction entre les protéines tom20 et les mitotrackers ? Les mitotrackers sont-t'ils des molécules qui se fixent aux proteines tom20 ou ils n'ont rien à voir les uns avec les autres et réagissent independamment ?
Et si les mitotrackeurs sont des marqueurs de la mitochondrie pourquoi sont-ils de très faible intensité dans le cas (1) et pourquoi sont-ils aussi éparses dans le cas (2) ??

[invite301082c0]

La partie centrale ovoïde noire correspond-t'elle au noyau de la cellule et tous les points rouges matérialisés par les mitotrackers correspondraient aux mitochondries ? Dans ce cas la délétion /\ 25-51 conduirait les protéines tom20 dans le noyau ? Où se sont-elles amassées aléatoirement dans la cellule comme lors de la délétion du domaine juxtamembranaire entier /\25-69 ?

Désolée pour la quantité de question mais j'ai vraiment beaucoup de mal à comprendre ce qui est représenté sur les clichés ce qui me pose évidemment beaucoup de difficultés pour comprendre cet exercice, et donc pour décrire et interpréter les résultats et tout simplement pour comprendre le but réel de l'expérience. Je ne sais pas si cela vient des énoncés qui sont mal rédigés ou de ma façon de les interpréter mais le cours correspondant que j'ai étudié en long en large et en travers (et que j'ai étayé par de multiples recherches personnelles autant dans des livres de biologie que par des vidéos de cours accessibles sur internet) reste très théorique et généraliste en ce qui concerne l'adressage des protéines et ne mentionne aucune expérience de ce type.

En espérant une réponse rapide de votre part (et même si celle-ci vient trop tard mieux vaut tard que jamais) car j'ai vraiment envie et besoin de comprendre.

Merci d'avance

[invitec9f0f895]

Bonjour.
J'ai eu le même exercice et j'ai du mal à comprendre la différence entre la localisation de la proteines dépourvue de la totalité de son domaine juxtamenbranaire /\25-69 (1) et celle de la protéine avec délétion /\25-51 (1)

Ce que je pensais :

(1) sans le domaine juxtamembranaire la proteines tom20 n'est pas àdressée vers la mitochondrie et s'agglutine en amas aléatoirement dans la cellule ou est adressée vers la mitochondrie mais ne s'ancre pas dans la membrane ?

Elle s'agglutine en effet mais n'est plus adressée à la mito.

(2) je ne comprend pas où est localisée la proteines tom20. Elle est a l'intérieur (au cœur) de la mitochondrie ? Et si c'est le cas comment cela est-il possible ?

Non Tom20 est ancré à la membrane de la mito.

Existe-t'il un lien, ou une interaction entre les protéines tom20 et les mitotrackers ? Les mitotrackers sont-t'ils des molécules qui se fixent aux proteines tom20 ou ils n'ont rien à voir les uns avec les autres et réagissent independamment ?

Ils sont indépendants.

Et si les mitotrackeurs sont des marqueurs de la mitochondrie pourquoi sont-ils de très faible intensité dans le cas (1) et pourquoi sont-ils aussi éparses dans le cas (2) ??

Il y a plusieurs possibilité. Les mutations de Tom20 peuvent affectées le fonctionnement des mito et donc leur apparence. La quantité et la forme des mito va aussi dépendre de l'état de croissance des cellules.

La partie centrale ovoïde noire correspond-t'elle au noyau de la cellule et tous les points rouges matérialisés par les mitotrackers correspondraient aux mitochondries ?

Oui la partie noire centrale est probablement le noyau.

Dans ce cas la délétion /\ 25-51 conduirait les protéines tom20 dans le noyau ? Où se sont-elles amassées aléatoirement dans la cellule comme lors de la délétion du domaine juxtamembranaire entier /\25-69 ?

Je dirais qu'elle s'accumule en bordure du noyau mais pas dedans. Cette expérience permet de dire que le motif permettant l'adressage à la mito est compris entre les aa 25 et 51 (et non pas entre 51 et 69).

Yoyo