DNA polymérase

[invited13ed27b]

Bonjour, j'avais une question peut-être naïve mais:

Admettons que l'on ait la séquence suivante avec une amorce:

5'TTTGACAGACTT3'
3'AAACTGTCTGAATGCTAGATCGGTTG5'

Maintenant, dans la solution l'on ne met que les nucléotides suivantes: dATP, dGTP et pas les 2 autres.
La polymérase va-t-elle continuer en créant des gap ou va-t-elle s'arrêter à la seconde près ou elle ne pourra pas rajouter une dnucléotide vu qu'elle ne sera pas présente?

J'avais une autre question, lorsqu'on ajoute de l'ATP en solution, c'est bien pour accélérer l'activité de la polymérase right?

Merci beaucoup.
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[Meiosis]

Bonjour,

Elle s'arrête car elle n'aura plus d'extrémité 3' pour mettre le nucléotide suivant. D'ailleurs on utilise ce principe dans le séquençage de Sanger, on met des ddNTP (dépourvus d'extrémité 3') pour arrêter la synthèse d'un brin dès qu'un ddNTP est incorporé.

[invited13ed27b]

Ah oui, vu comme ça c'est plutôt logique.
Merci beaucoup !

[invited13ed27b]

Et du coup, ajouter de l'ATP dans la solution, ca augmente l’efficacité ou vitesse de l'enzyme polymérase?

[A voir en vidéo sur Futura]

[Meiosis]

Je ne sais pas, quelqu'un d'autre pourra sans doute te répondre.

[Flyingbike]

ben c'est surtout indispensable, puisque l'enzyme fonctionne avec des nucléotides triphosphates...

[Meiosis]

ben c'est surtout indispensable, puisque l'enzyme fonctionne avec des nucléotides triphosphates...

Mais pour l'ADN polymérase il faut du dATP et pas de l'ATP (ce serait pour l'ARN). Non ?

[Flyingbike]

oui right, mauvaise habitude parce qu'on ne dit pas toujours le "d" de "dATP"

L'ATP (le ribonucléotide) je dirais que ça aurait plutôt tendance a l'emmerder, la DNA polymérase...

[invited13ed27b]

Enfaite, voici la question, j'ai tout compris sauf pourquoi ils insistent avec l'ATP ^^

[Flyingbike]

la question 3 ?
ben vous connaissez la différence, déjà, non ? qu'est ce qui vous pose problème ?

[invited13ed27b]

Oui oui, c'est pour la dernière, citer des exemples d'utilisation en biologie moléculaire?
Nous savons à quoi sert l'ATP mais s'en servir en labo c'est tout autre chose...

[Flyingbike]

Par exemple pour la transcription in vitro, pour la ligation de l'ADN, pour des réactions de phosphorylatuon, etc